PAS染色法具体步骤

PAS染色法具体步骤

PAS染色法，即过碘酸雪夫试剂染色法（Periodic AcidSchiff stain），是一种常用的组织化学染色技术，用于检测组织中的碳水化合物、黏多糖、糖蛋白等物质。以下为PAS染色的具体步骤：

1. 标本处理

将待染色的组织样本固定在10%的甲醛溶液中，通常需要固定24小时以上。

固定后的组织样本进行脱水处理，通常使用乙醇逐步脱水，从70%乙醇到100%乙醇。

2. 清洗

将脱水后的组织样本在蒸馏水中清洗几次，去除乙醇。

3. 水合

将组织样本在水中进行水合处理，通常需要经过从95%乙醇到水的梯度。

4. 碘酸氧化

将水合后的组织样本放入0.5%过碘酸溶液中，室温下氧化处理510分钟。

5. 清洗

使用蒸馏水彻底清洗组织样本，去除过碘酸。

6. 还原

将组织样本放入0.05%亚硫酸钠溶液中，室温下还原处理510分钟。

7. 清洗

使用蒸馏水彻底清洗组织样本，去除亚硫酸钠。

8. 染色

将组织样本放入0.5%雪夫试剂中，室温下染色30分钟。

9. 清洗

使用蒸馏水彻底清洗组织样本，去除雪夫试剂。

10. 晾干和封片

将组织样本在空气中自然晾干，或用吹风机吹干。

将组织样本进行封片处理，以便于显微镜观察。

信息来源

《组织化学技术手册》（Widmer M. Histotechnology: A SelfInstructional Text. 4th ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2007）。

常见问题清单及解答

1. PAS染色法的主要目的是什么？

PAS染色法主要用于检测组织中的碳水化合物和黏多糖等物质。

2. 为什么需要进行固定？

固定可以防止组织样本在处理过程中发生自溶和形态改变。

3. 过碘酸氧化的作用是什么？

过碘酸氧化可以破坏糖类分子的糖苷键，使其暴露出醛基，便于与雪夫试剂反应。

4. 为什么需要亚硫酸钠还原？

亚硫酸钠可以将过碘酸氧化产生的碘离子还原成无色的碘离子，防止其对后续染色步骤产生干扰。

5. PAS染色法有哪些应用？

PAS染色法常用于检测肾小球疾病、肿瘤、纤维化等疾病。

6. PAS染色法有哪些优点？

PAS染色法操作简单，染色效果良好，对细胞核和细胞质的染色清晰。

7. PAS染色法有哪些局限性？

PAS染色法对某些物质（如脂肪）的染色效果较差。

8. PAS染色法与其他染色方法相比有什么优势？

与苏木精伊红染色法相比，PAS染色法对糖类、黏多糖等物质的检测更为敏感。

9. PAS染色法在病理诊断中有何意义？

PAS染色法可以帮助病理医生判断肿瘤的良恶性、纤维化程度等。

10. 如何提高PAS染色的质量？

选择合适的组织固定剂和染色试剂，严格控制染色时间，确保染色均匀。