标题：手工HE染色操作步骤
一、引言
HE染色（苏木精伊红染色）是病理学中常用的一种染色技术，用于观察组织切片的细胞结构和组织形态。以下将详细介绍手工HE染色的操作步骤。
二、操作步骤
1. 切片准备
取组织切片，置于染色盒中，用流水冲洗510分钟，去除固定液。
使用酒精梯度进行脱水，依次使用70%、85%、95%和100%酒精各处理5分钟。
2. 脱水处理
将切片置于无水乙醇中，处理510分钟。
然后将切片置于二甲苯中，处理510分钟。
3. 复水
将切片取出，置于水中浸泡10分钟。
4. 苏木精染色
将切片置于苏木精染液中，室温下染色1015分钟。
将切片取出，置于流水下冲洗，直至切片呈淡蓝色。
5. 伊红染色
将切片置于伊红染液中，室温下染色23分钟。
将切片取出，置于流水下冲洗，直至切片呈红色。
6. 分色处理
将切片置于1%盐酸酒精中分色，观察细胞核和细胞质颜色的变化。
当细胞核呈蓝色，细胞质呈红色时，取出切片，置于水中浸泡。
7. 中性树胶封片
将切片置于中性树胶中，滴加适量树胶，覆上盖玻片，轻压使封片牢固。
8. 保存
将染色的组织切片置于干燥、通风、避光的环境中保存。
三、常见问题清单及解答
1. 问题：为什么切片在染色过程中会出现褪色现象？
解答：褪色可能是因为染色液浓度不足或染色时间过长。应检查染色液的浓度，并适当调整染色时间。
2. 问题：切片在脱水和复水过程中会出现皱缩现象，如何处理？
解答：皱缩现象可能是由于脱水过度或复水不足。应适当控制脱水时间，并延长复水时间。
3. 问题：苏木精染色时间过长，切片颜色过深怎么办？
解答：苏木精染色时间过长会导致切片颜色过深。应缩短染色时间，并观察切片颜色变化。
4. 问题：伊红染色时间过短，切片颜色过浅怎么办？
解答：伊红染色时间过短会导致切片颜色过浅。应延长染色时间，直至切片颜色均匀。
5. 问题：分色过程中切片颜色变化不明显怎么办？
解答：分色过程中切片颜色变化不明显可能是因为分色时间过短或盐酸酒精浓度过高。应适当延长分色时间，并调整盐酸酒精浓度。
6. 问题：封片过程中盖玻片与切片之间出现气泡怎么办？
解答：气泡可能是由于树胶未充分覆盖或操作不当。应确保树胶均匀覆盖切片，并在操作过程中避免产生气泡。
7. 问题：染色过程中切片出现霉变怎么办？
解答：霉变可能是由于切片保存环境潮湿。应将切片置于干燥、通风、避光的环境中保存。
8. 问题：染色过程中切片出现脱片现象怎么办？
解答：脱片可能是由于切片固定不牢或染色时间过长。应确保切片固定牢固，并适当控制染色时间。
9. 问题：苏木精染液和伊红染液应该如何配置？
解答：苏木精染液可用苏木精1克，95%酒精100毫升，盐酸酒精1毫升配制。伊红染液可用伊红Y 0.5克，95%酒精100毫升配制。
10. 问题：染色过程中如何判断染色效果？
解答：染色效果可以通过观察切片的颜色和细胞结构来判断。细胞核应呈蓝色，细胞质应呈红色，且颜色分布均匀。
