高中数学逆袭方法篇1
关键词：“逆袭”流行词意义用法
“逆袭”一词近两年在人们的日常生活中被广泛使用，但关于其意义、用法，以及产生、发展、来龙去脉，人们似乎并不是很清楚。本文将在考察现实语料的基础上，探讨上述问题。
一、“逆袭”的来源
百度百科提到“逆袭”一词有三种来源，一是来自日语“ぎゃくしゅう”，表示反击、还击的意思；二是来自网络游戏，指向玩家聚集的城市或基地发动的进攻，或指玩家在游戏的逆境中反击成功；三是来自动漫作品，表示某一不同常态的攻击行为。[1]肖鹂则认为“逆袭”一词在我国北宋就已经出现了，是一个土生土长、历史悠久的汉语词。[2]经过考察，我们认为“逆袭”一词应该源自日语，因为早在1914年出版的日本作家夏目漱石的《心》中，就出现了“逆袭”一词：
（1）“何故先刻（さつき）Kの言を遮（さへぎ）つて、此方（こつち）から逆（ぎゃくしう）しなかつたのか、其所（そこ）が非常な手落（てぬか）りのやうにえて来ました。”（《心》第三十七章）
这句话的“逆袭”为反击、还击的意思，与后来在动漫、游戏和汉语文献中使用的“逆袭”一词显然密切相关。
至于肖鹂在论文提到“逆袭”最早出现在我国北宋的《册府元龟》一书所举的例句：
（2）“临澧侯袭为安成太守，晋安王子勋为逆袭。据郡拒之，子勋遣军攻围不下，明帝嘉之以为郢州刺史。”
经我们考证，该例句中的“逆袭”并非一个词，其中的“逆”指造反，“袭”却指安成太守刘袭（人名），该句应断为“临澧侯袭为安成太守，晋安王子勋为逆，袭据郡拒之，子勋遣军攻围不下，明帝嘉之以为郢州刺史。”①所以无法认定“逆袭”最早出现于我国北宋。现从北大语料库中能够查到“逆袭”一词的最早用例是我国民国时期蔡东藩编写的《民国演义》一书，而该书的写成时间为1916至1926年之间②，“逆袭”出现的时间应比夏目簌石的《心》更晚。所以就目前的材料来看，可以认定现代汉语中的“逆袭”应是来自日语的借词。该词虽然在20世纪20年代已经进入现代汉语，但直到近两年才大量出现，成为一个流行词。
二，“逆袭”的意义和用法
（一）意义
“逆袭”虽然来自日语，但不难看出其与汉语“逆”与“袭”两个单音节词在意义上的联系。“逆”在[3]段玉裁版本的《说文解字注》里解释为：“逆,迎也。从，声。”即表示“相对、相反”的意思。“袭”的本义为左衽袍，后引申为沿袭、袭击等意思。“逆袭”最早在日语中表示反击、还击的意思，应该是受到汉语单音节词“逆”与“袭”影响的结果。
“逆袭”一词在汉语中主要有以下几种意义：
1、表示在战斗防御中以小部队进行反击。例如：
（3）正在沉吟之时，忽又接到报告，周西成乘邓锡侯回救长寿，后路空虚，回兵向杨森逆袭。（《民国演义》第146回）
2、网络游戏或动漫作品中的攻击行为。例如：
（4）4399《神武九天》暗黑BoSS暴走热血逆袭（人民网新闻标题）
3、侵扰，侵袭。例如：
（5）一个艳影，正对于他的可怜的灵魂，施行韧性的逆袭，像一个勇敢的苍蝇，刚把它赶走了，又固执地飞回原处来。（茅盾《动摇》）
4、人在逆境中反击或抗争。例如：
（6）netflix逆袭：从失足青年到硅谷精英。（腾讯科技新闻标题）
5、弱小一方战胜强大一方。例如：
（7）自营电商将“逆袭”平台电商互联网。（长江日报，2013.5.17）
上述意义中，第4、5种最为常见。
（二）用法
“逆袭”是一个动词，在句子中的主要用法有：
1、用作及物动词，后面接名词性宾语。“逆袭”一词表示名词性成分的劣势方成功反击，战胜宾语的优势方。例如：
（8）传统童装逆袭电商，芊寻服装为自己代言。（慧聪网新闻标题）
2、用作不及物动词，表示进行反击，或反击成功。例如：
（9）黄金期货价格暴跌是噩梦，期待清洗后逆袭。（金投网新闻）
“逆袭”常常与另一个流行词“丝”相连使用，构成“丝逆袭”、“丝的逆袭”、“丝逆袭白富美”等常用短语，例如：
（10）周星驰血泪龙套史，揭星爷丝逆袭全过程（光明网新闻标题）
除了以上常见的用法外，“逆袭”在句中也可以处于主、宾和定语的位置。
（11）智能手机硬件厂商的逆袭注定无功而返（腾讯科技新闻标题）
(12)“抢金狂潮”引发金价逆袭一周时间大涨超100美元(东南网2013.4.26)
从以上例句可以看出，“逆袭”一词虽然用法简单，但随着该词使用越来越广泛，它所能表达的意思也越来越丰富，在句中的位置也越来越灵活。
三、“逆袭”复活并流行的原因
“逆袭”一词在20世纪20年代被借入现代汉语后，并没有立即流行开来，只在少数文学作品里出现。改革开放以后，该词开始被网游爱好者使用，使用范围有限，出现频率不高。直到近两年才伴随着“丝”一词的流行而流行开来。经“百度指数”统计，“逆袭”在一词在2011年以前，用户关注度和媒体关注度都很低，但进入2012年后被高度关注，在2013年1月用户关注度和媒体关注度都达到顶峰。
随着网络和各大媒体的宣传，逆袭一词已经渗透到人们的日常生活当中，在人们日常口语、网络聊天乃至严肃的官方媒体中都频繁出现。如：
（13）微利时代的逆袭――来自辽宁本钢集团的调查（《人民日报》2012.12.26）
（14）数说车市：奇瑞被逆袭自主第一之位易主（新华网2013.1.29）
（15）大校称越南特种部队无力逆袭中国岛礁。（凤凰网新闻标题）
为什么“逆袭”一词能在“沉睡”百年之后能重新复活并快速流行起来呢？我们认为有以下几种原因：
（一）“逆袭”一词特有的新颖性、模糊性、丰富性使其具备复活并流行的条件。“逆袭”一词出现之初就没有精确的解释和定义，而随着流行度的提高和范围的扩大，其外延就愈加模糊，具有不确定性，人们可以根据自己的情况对其再进行创造性的运用。虽然“逆袭”的语义模糊，但其语用表达功能却非常新颖和丰富，以最常见的“丝逆袭白富美”为例，该短语的出现让人耳目一新，而且表意丰富，语用表达功能非常强，一下子就成了人们的口头禅。
（二）发达的网络及媒体为“逆袭”的流行提供了便利。在知网的论文中含有逆袭一词的论文在90年代以前仅有118篇，而在2012年一年就有913篇，逆袭一词在经过这么多年的沉寂后这次呈井喷式的发展，不得不归功于网络和媒体。虽然逆袭的词义已经单一化，但必须承认是新的时代和新的传播方式使逆袭有了时代的烙印。
（三）从众、求新心理推动“逆袭”一词快速流行。逆袭一词这次成功复活最初是出现在网络游戏中，而网游群体主要是以青少年为主，而这一群体的特点就是灵活，变化快，能很快的接受新事物，从众心理强。因此，新事物在青少年中的传播尤为迅速。百度指数显示，“逆袭”一词的使用者年龄主要分布在10-39岁，职业分布以教育/学生和it行业为主。
（四）平民时代的“丝文化”促使“逆袭”成为一种口头禅。这次逆袭能够成功“逆袭”我们的眼球，是因为它满足大众积极向上的心理。而大部分的新新人类、大学生、办公室的菜鸟等等，总之各行各业都需要有这样一种精神风貌，来鼓励自己能够努力，达成看起来不可能完成的目标。
（五）社会的开放度和包容度高使“逆袭”一词能够广为接受。这次逆袭的使用可以说是小部分影响大部分，从草根到上层，从非主流进入到主流，甚至从日常的口语交际到书面正式文体，这也是因为我国的舆论慢慢的开放，对普通大众的日常生活越来越关注，使用语言的平民化也可以更好的被大家所接受。
随着新事物的增加和网络的四通八达，现有的词汇和词汇的意义已经不能满足人们日常生活和交往的需要，这时，人们往往会创造新的词汇或赋予旧有词汇以新的意义，“逆袭”一词的流行便是如此。我们在见到这些词汇的时候不能仅仅从经验出发来接受或排斥，更重要的是要结合当时的语言背景来对某一词汇进行理解。而这些随时代产生的词语的生命力有多强，能走多远，只有时间能给出答案。
注释：
①据《宋书・列传第十一宗室》记载：“袭字茂德,太子舍人,安成太守。晋安王子勋为逆,袭据郡距之,子勋遣军攻围不能下。太宗嘉之,以为郢州刺史,封建陵县侯,食邑五百户。”
②参考百度百科“民国演义”词条
参考文献：
[1]肖鹂《新义词“逆袭”》，《中学语文》2013（4）
[2]百度百科：/view/1132898.htm
[3]段玉裁.《说文解字》注（汉）许慎撰[m].河南：中州古籍出版社,2006.
高中数学逆袭方法篇2
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（左）迪卡侬大中华区副总裁易昂
（右）迪卡侬亚洲地产总裁邸百航
3月底，在开业6年之后，位于北京最繁华地段王府井大街的耐克旗舰店悄然关闭。作为耐克在中国直营的第一家旗舰店，它的关闭引得众多粉丝迷唏嘘不已。就在耐克关店的同时，在车程不到10公里的北京城东南角，迪卡侬大郊亭店正在如火如荼地进行着升级改造。5月，工程就将完工，届时，它的销售面积将达到8000平米，成为迪卡侬在亚洲最大的门店。
耐克的关店和迪卡侬的扩建，一冷一热的对比，体现出的是二者市场境遇的冰火两重天。库存危机带来的关店大潮正在席卷整个运动行业，耐克、李宁等众多国内外公司纷纷中招。然而迪卡侬却在过去的一年里刷新了自己开店速度的纪录，将门店数量从39家一举提升至56家。而且这个纪录很快就会被打破，按照计划，迪卡侬年内会在国内再新开25家左右的门店，并在2015年实现150家门店的初期目标。
“对我们而言，中国市场是不可限量的，机遇到处都在。”迪卡侬亚洲地产总裁邸百航告诉《商业价值》，“在新开店的三四线城市，我们每天都能看到销售数字上的惊喜。”
同行们都在经历寒冬，而在迪卡侬的感受中，市场却是一片大好，背后的原因是什么？“慢半拍”的迪卡侬
2010年之前，和其他高歌猛进的运动品牌相比，迪卡侬总是给人“慢半拍”的印象。
之所以说迪卡侬是一家慢公司，是因为这家公司在20年前就已经以生产商的身份开始在中国市场发展，但是直到2003年才在上海开出了第一家门店。此后的9年时间里，迪卡侬仅仅将自己的店铺数量提升到了39家，而这段时间，正是中国体育用品市场的黄金10年，国内外的知名运动品牌一路高歌猛进地开出了数千家门店，其中李宁、安踏两家的门店数量更是一度逼近万家。
2010年以后受到市场环境的影响，运动品牌们纷纷放慢了脚步，而“慢半拍”的迪卡侬却在这个时候开始慢慢踩紧油门提速。去年，本土运动市场遭遇到了10年来最大的滑坡，排名靠前的运动品牌合计关掉了数千家店铺，然而迪卡侬却逆市新开了16家门店，这简直就是在向同行们“示威”。
表面上看，当下的迪卡侬似乎是在开足马力狂奔，但这其实只是一种错觉。现实的情况是，几年前市场上那些“飙车”的运动品牌们纷纷遭遇发动机爆缸，抛锚在了路边，于是，后面一直不紧不慢行驶的迪卡侬开始上演接连超车的好戏。
当然，业务模式的不同决定了迪卡侬不会拥有像当年的李宁、安踏们那样惊人的发展速度，但是对于迪卡侬，眼下的发展速度也远远没有达到自己能力的上限。事实上，这家公司一直在有意克制自己扩张的冲动。比如，迪卡侬早在2008年就在武汉光谷设立了办公室，但直到今年1月，武汉的首家迪卡侬卖场才正式开张。
这种克制的背后，其实源于这家公司的耐心。作为一家非上市的家族企业，迪卡侬不用来承担太多短期的业绩压力，这让他们能够相对从容地按照自己的步调前进。
迪卡侬中国的管理层多次对外表示，公司所看重的是长远的利益，而非眼下的得失。在中国，迪卡侬运作的项目合同基本都是在20年以上，这也是国家规定的最长限度。“当我们选择一个地方开店的时候，我们是做好长期在这里投资的准备，会跟这个区域一起发展20到30年。”迪卡侬大中华区副总裁易昂说，“而且，我们还跟合作伙伴们有一个君子协定，就是在合同期限到期后还会续签。”
当然，着眼未来并不意味着不看重短期的收益。易昂介绍，每家新开的门店在开店4年后，总部会有一些业绩指标上的要求，但在这之前，对于迪卡侬中国区来说，他们有足够的时间将先把基础打牢靠，建立知名度、在提供优秀的产品和服务上做文章。在今天的市场上，迪卡侬能够一直按照自己的节奏有条不紊的发展，这种耐心恰恰是本土企业身上最为缺乏的东西。高速奔跑时的平衡术
如何在高速扩张的过程中不出问题，这是一门学问。
许多公司一旦走上快速扩张的道路就会逐渐失控，而这背后共同的原因在于扩张带来的虚幻繁荣会让老板对公司的认知产生偏差。当下许多本土运动品牌受到重创的根源就在于误以为自身已经具备了挑战耐克等国际品牌的实力，于是盲目拔高，最终，期盼的华丽转身没有发生，反而因为失去了曾经安身立命的优势而被消费者抛弃。
而迪卡侬身上最值得称道的地方就在于它一直十分清楚自己的核心竞争力在哪，并且将它坚持到底。对于迪卡侬来说，这种竞争力首先集中体现在它的产品性价比上。
过去3年，整个运动市场的一大特征就是无论国际还是本土品牌都在不断涨价。耐克旗舰产品的价格与3年前相比几乎翻了一番，本土品牌也不甘落后，几乎每季的订货会都会上调产品价格，而且动辄就是10%以上，这一度招来了许多消费者的不满。
就在同行们挖空心思希望多赚钱的时候，迪卡侬却反其道而行之，想办法帮用户“省钱”。易昂告诉《商业价值》，过去的两年时间里，迪卡侬产品的平均价格下降了5%。
在这样一个Cpi不断上涨的时代，迪卡侬的降价举措多少有点不可思议。之所以能做到这一点，易昂解释说，这与迪卡侬的扩张是相辅相成的。公司体量增长带来的是产品数量以及订货量的增加，这让迪卡侬在面对上游原材料供应商时的议价能力也进一步增强，因此能够更好地控制成本。“我们希望在产品材料、技术性能同等的条件下，价格能够比耐克等品牌的产品低至少20%到30%。”
迪卡侬内部的调研数据显示，其顾客的月收入平均在8000元以上。这是十分值得玩味的一点，对于这些消费者来说，选择迪卡侬绝不是因为他们消费不起更高价格的产品，而是他们对产品的选择十分理性。
“中国消费者对于产品的理解越来越深，也变得越来越精明，如果一个产品只值500块，那他一定不会掏1000块。”回顾过去两年市场的变化，这一点让易昂印象深刻。
明星代言和洗脑式的品牌广告对国内消费者的魔力正在迅速衰减，在痴迷耐克和阿迪达斯多年之后，一些中国消费者开始回过神来，将注意力重新放到了产品本身上面，而不是品牌公司赋予它们的各种精神和内涵。
迪卡侬恰恰在此时抓住了这部分“实用主义至上”的消费者的需求，因此在动荡的市场上站稳了脚跟。
除了坚守产品性价比的最优，迪卡侬能够逆势增长的原因在于始终保持自己的专业定位，不断挖掘消费者的运动需求。过去两年间，迪卡侬门店中的产品数量由过去的5000种增加到了现在的8000种。当某个运动门类的产品销售放缓的时候，立刻会有新的产品接过盈利的重任。
以滑雪运动为例，易昂透露，两年前，滑雪装备市场在中国几乎是不存在的，但如今相关的产品在迪卡侬店里的销售却火爆异常，刚刚过去的冬天，迪卡侬滑雪产品的销售额增加了50%，而在北京市场，这一数字更是超过了60%。
中国的体育用品市场在经历了黄金10年后，正在迈向一个全新的阶段。眼下行业的衰退其实本质上是一次消费需求的升级换代。传统门类的运动，比如篮球、跑步、健身等产品的需求依旧保持稳定存在，但是市场已经高度饱和，运动人群的兴趣点正在发生转移，滑雪、自行车、垂钓、高尔夫等细分运动开始成为他们的新宠，但传统的运动品牌们并不能提供这样的专业产品。于是，拥有近70个门类运动产品的迪卡侬就迎来了自己的机会。
在一个快速变革的市场，在适应市场需求的同时坚持自己的核心竞争力，这才是迪卡侬能够在一个衰退的市场大环境中屹立不倒的根本原因。挑战在哪？
快速的扩张当然也会面临一些挑战，对迪卡侬来说当然也不例外。
从企业内部讲，困扰大多数同行的库存问题并没有让迪卡侬感到头疼。迪卡侬的全产业链模式让它的终端卖场和旗下的各品牌之间能够实现很好的沟通，并且灵活地调整工厂订单。既然暂时不用为库存发愁，那么迪卡侬眼下最棘手的工作是什么呢？
易昂的回答让人有些意外：“人才是迪卡侬现在面临的首要问题，我需要找到足够多的有潜力的员工和管理人才，尽快替代目前的外派人员。”
目前，迪卡侬在中国已经拥有大约5000名员工，而为了尽快完成在中国市场的战略布局，3年内迪卡侬还将再招募至少5000名员工，这其中有1000人将成为经理级别的管理者。
迪卡侬的店长拥有很大的权利。虽然迪卡侬拥有完整的产品线，但是面对中国这样一个庞大的市场，每个地方都有自己独特的需求。比如由于气候的问题，滑雪产品就不适合在南方大规模销售。正因有这样的差异存在，迪卡侬的店长们就必须学会根据所在市场的具体情况进行选品，而且在日常经营中也要根据市场的变化灵活制定打折策略。让新晋的员工达到这样的高度，显然不是一朝一夕能够完成的事情。
这些店长们将成为迪卡侬感知市场的触角，他们在很大程度上决定了迪卡侬在一个地区的成败。
而从外部环境上看，眼下迪卡侬也在面临一些同行的挑战。
一方面，本土运动品牌开始将触角伸向户外品类的运动，户外运动市场至今也已经产生一定的泡沫。
另一方面，迪卡侬的模式也开始有人模仿。两年前，国美曾经借鉴迪卡侬模式在北京开设了两家大型的运动卖场，然而隔行如隔山，最后因为运营不善关门了事。如今，国内的巨头百丽也已经在上海开设了一家名叫topSportsii的大型综合运动卖场，不过与迪卡侬定位入门消费人群不同的是，百丽将客户群定位成为更加专业的成熟消费者。
这样的定位能否成立，暂时还不得而知，但与当年的国美体育相比，百丽无疑在鞋服产品的生产和零售上拥有更为丰富的经验，这些都能够增加它的胜算。
总体而言，眼下似乎还没有哪个对手能够真正威胁迪卡侬的发展。“中国的市场足够大，每个人都有自己的空间。”易昂说。
不过，从更加长远的角度来看，真正可能会动摇迪卡侬根基的或许是电商兴起而带来的零售业态的改变。
高性价比和体验式购物是迪卡侬对于消费者的最大价值所在，也是迪卡侬在面对竞争者时最为有力的武器，但电商对这两方面都会发起挑战。
互联网品牌最大的优势就是价格，比如在凡客，市场上动辄上千的冲锋衣被做到了只卖二三百元，虽然在产品质量和专业性上互联网品牌还无法与迪卡侬竞争，但这并非不可逾越的障碍。
而迪卡侬体验式购物的优势未来也会逐渐减弱。体验式购物对中国消费者产生吸引的最大原因在于，迪卡侬的客户中有大量入门级的运动爱好者，他们对想要从事的运动项目了解很少，对产品的知识就更加匮乏，因此必须要在店内亲身体验之后，才知道自己到底需要什么。
比如迪卡侬的自动快开帐篷，虽然使用便捷，但是如果没有店员亲自演示一遍操作方法，许多消费者自己是搞不定的。
但这样的情况只是暂时的，当市场完全成熟后，现场体验的需求也会降低，而那时，迪卡侬将会面临真正的考验。
高中数学逆袭方法篇3
知己知彼,制定有效目标
要制定有效的目标，首先最需要的事情就是——“了解自己”！
首先我们做个小测试，用平常成绩就可以对应找出最适合自己的学习方式，超级实用哦，耐心测一测！
准备好上学期大型考试各学科成绩单（月考级以上），根据学期各科的成绩，按照下方自测表所得结果，找到与你实际情况相符的一项，了解如何制定新学期学习计划。
综合全能型
测试结果：3a
你是所有学生都渴望逆袭的目标，你的忧虑不应该是“如何逆袭”，而是“如何不被逆袭”。你过去的学习方法是可圈可点的，但随着所学知识的增多，一定要及时对自己的学习方法和经验进行总结分析，取其精华去其糟粕，持续保持学习优势。
优质潜力型
测试结果：3B；2B+1a；1B+2a
你在综合成绩上表现比较突出，各科实力也相对平均，具备往更高水平冲刺的潜力。在制定新学习计划时，你可以在巩固当前成果的基础上，尝试加大“求难”的比例，尝试挑战更高难度的题目，除了课本知识以外积极扩展知识面，冲刺高分。
基础薄弱型
测试结果：3C；3D；2C+1D；2D+1C
你的综合基础相对薄弱，且更多是由于基础知识的缺漏或掌握程度不佳导致，因此在制定新的学习计划时，要注重基础知识的梳理和吸收，不盲目求难，同时对自己的学习方法和状态进行分析诊断，及时调整改变不适应当前学习状态的方式，以免情况进一步恶化。
偏科型
高中数学逆袭方法篇4
【摘要】目的：探讨中期因子(midkine，mK)基因小干扰Rna对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：培养人胃癌BGC823、HGC27、mGC803及SGC7901细胞株，以荧光实时定量pCR方法检测中期因子基因mRna表达;筛选出中期因子表达最高者。采用中期因子基因小干扰Rna转染胃癌细胞株，分别以荧光实时定量pCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRna和蛋白水平，然后以四唑蓝(mtt)比色法检测细胞黏附性，以Boyden方法检测癌细胞侵袭力。结果：4株胃癌细胞中，中期因子均有不同程度的表达，以胃癌BGC823细胞最高;以mKsiRna转染胃癌BGC823细胞后，癌细胞中期因子基因mRna和蛋白水平明显下降，且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降，细胞侵袭力明显下降。结论：中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRna转染胃癌细胞，可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力。
【关键词】胃癌;中期因子;Rna干扰;黏附;侵袭
[abstract]objective:tostudytheeffectsofmidkine(mK)genesmallinterferingRna(siRna)onadhesionandinvasionofhumangastriccancercell.methods:RealtimepCRwasusedtoevaluatethemKmRnaexpressionofhumangastriccancercelllinesBGC823，HGC27，mGC803andSGC7901.thecellofmKhighestexpressionwastransfectedwithdifferentdoseofmKsiRna.theexpressionofmKmRnaandproteinwereweredeterminedbyrealtimequantitativepCRandimmumoflurescencemethod.thecelladhesionwasevaluatedbymttassay，andinvasionwasexminedbyBoydenchamber，respectively.Results:CelllineBGC823showedthehighestelevationofmKmRnainfourgastriccancercelllines.theresultsfromrealtimequantitativepCRandimmumoflurescencemethodshowedthatmKmRnaandproteinreducedintimeanddosedependentmanners(p
[Keywords]gastriccarcinoma;midkine;Rnainterference;adhesion;invasion
尽管胃癌的诊断和治疗已经有了长足的进步，但进展期胃癌的预后依然很差，5年生存率徘徊在20%～30%。己经证实，胃癌的发生发展是多基因改变的结果。胃癌中特殊基因的表达异常在不同的细胞功能中发挥了重要作用，如细胞黏附、信号传导、细胞分化、细胞增殖及转移。更好地了解胃癌发生发展的分子机制将有利于胃癌的诊治及预防。
许多研究表明生长因子不仅促进组织细胞的增殖，而且能诱导组织细胞的恶性转化，在肿瘤的发展中发挥了重要的角色。中期因子(midkine，mK)基因是1988年muramatsu等[1]在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系Hm1细胞cDna文库中发现的一种新基因，其后，在多种动物和人类中均已发现了中期因子基因。中期因子和另一种相似的细胞因子——多效生长因子(pleiotrophin，ptn)一起归为一类新的肝素结合因子家族(heparinbindingfactorfamily)[1]。研究发现，中期因子在许多肿瘤如食管癌、结肠癌、胰腺癌、肝细胞癌、肺癌等多种癌细胞和组织中过表达，而在正常组织中表达很低或不表达[2-7]。因此，中期因子有可能作为肿瘤标志物在肿瘤的诊断、预后和治疗中发挥作用。目前，关于中期因子与胃癌的关系研究较少。
本研究以胃癌细胞为模型，以小干扰Rna(smallinterferingRna，siRna)介导的Rna干扰(Rnainterference，Rnai)技术下调癌细胞中期因子表达，旨在探讨中期因子基因在人胃癌细胞黏附、侵袭中的可能作用。
1材料和方法
1.1材料
人胃癌BGC823、HGC27、mGC803及SGC7901细胞株，由本院组织细胞生物库冻存。mKsiRna正义链序列：5′aGGaCUaGaCGCCaaGCCUtt3′，由美国Dharmacon公司合成。Rpmi1640购自Gibco公司;trizol、实时pCR扩增试剂盒和脂质体转染试剂Lipofectaminetm2000及逆转录试剂盒购自invitrogen公司;鼠抗人mK及β肌动蛋白抗体购自SantaCruz公司;mtt购自Sigma公司;基膜基质matrigel购自BectonDickinson公司。
1.2方法
1.2.1细胞培养
胃癌细胞在含10%胎牛血清(fetalbovineserum，FBS)的RBmi1640培养液，37℃、5%Co2、饱和湿度环境的条件下连续培养。待对数生长期时，收取细胞，进行以下试验。
1.2.2胃癌细胞mKmRna检测
采用荧光实时定量RtpCR方法检测中期因子mRna。
1.2.2.1细胞总Rna提取及cDna合成
根据说明书，分别采用trizol试剂盒提取细胞总Rna，采用逆转录试剂盒合成cDna。
1.2.2.2定量Rt
pCR采用荧光实时定量pCR检测。收集细胞，以trizol抽提细胞总Rna，取总Rna1μg，以oligodt(15mer)为引物逆转录合成cDna第一链，以此cDna链2μl为模板进行pCR扩增，步骤参照逆转录试剂盒说明书进行。引物序列上游：5′GCGCGCtaCaatGCtCaGt3′，下游：5′CCCttCCCtttCttGGCttt3′。Fam探针：5′CatGGGtGCCCCGaCGttGC3′tamRa。pCR反应条件：95℃，预变性3min，95℃30s，52℃45s，72℃45s;35个循环后，72℃再延伸7min。反应后生成熔解曲线。mK基因表达值以2-ΔΔCt表示[8]。
1.2.3siRna转染
借助于Lipofectaminetm2000进行转染，具体操作参照说明书进行。转染前1d，将1.0×105对数期生长的细胞接种于24孔培养板，1ml/孔，培养过夜。次日进行转染。细胞分组：①空白对照组(Cona)：未经任何处理的胃癌细胞;②空载对照组(ConB)：即脂质体对照组;③错配对照组(ConC);④siRna组：10%FBS的Rpmi1640中含不同浓度的已用脂质体包埋的siRna。
1.2.4转染后中期因子基因mRna及蛋白水平检测
1.2.4.1mRna水平
采用荧光实时定量Rt-pCR方法检测，方法同上。
1.2.4.2蛋白水平
采用免疫荧光法检测。将胃癌细胞接种到预先放置盖玻片的培养皿中，细胞和盖玻片表面完全吸附后，用pBS洗2次，丙酮固定。pBS振洗后吹干。滴加mK单克隆抗体(1∶1000)覆盖整个切片，4℃过夜。pBS振洗3次后吹干。滴加1∶50稀释的FitC标记的二抗，37℃保温30min。pBS振洗2次后用蒸馏水振洗。50%缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察，拍照，荧光强度扫描。
1.2.5胃癌细胞黏附力检测
参照文献[8]方法进行，部分步骤有改动。96孔培养板的每个孔铺以50μl基质胶(1∶20稀释)，然后每孔加入含10mg/ml小牛血清白蛋白的无血清Rpmi1640培养液50μl，作用1h。每孔加入2×104的悬浮细胞，放入Co2培养箱中。作用1h后，没有黏附到培养板上的细胞被洗掉，已经黏附的细胞被胰酶消化，然后计细胞数。黏附力=siRna组细胞黏附数/Cona细胞黏附数×100%。
1.2.6采用Boyden小室模型检测癌细胞侵袭能力
Boyden小室上下室之间铺聚碳酸醋微孔滤膜(孔径8μm)，滤膜上包被有matrigel。用无血清培养基准备单细胞悬液，并调整浓度为2.5×104/ml。细胞以500μl无血清培养基重悬，接种于培养小室的上层，小室下层加入500μl含10%FBS的培养基作为趋化物。在37℃，5%Co2，饱和湿度条件下分别培养72h后，用棉拭子去除上室底部基质胶并移除未侵袭细胞;接着固定30min，pBS漂洗2次;He染色30min。随机选择5个100倍显微视野统计总细胞数，以侵袭细胞的相对数目表示肿瘤细胞的侵袭能力。每组设3个平行样本，取其平均值，进行统计学分析。
1.2.7统计学分析
数据资料以x±s表示，以SpSS10.0统计软件分析。用Levene法进行方差齐性检验。若方差齐，用单因素方差分析，组间及组内比较用LSDt检验;若方差不齐，用GamesHowell法进行分析。
2结果
2.1胃癌细胞株中期因子基因mRna表达水平
荧光定量pCR结果显示熔解曲线具有单峰特异性。见图1。荧光实时定量RtpCR结果显示，mKmRna在mGC803、SGC7901、HGC27及BGC823分别为0.003±0.000、0.678±0.202、0.936±0.251、1.753±0.244。BGC823细胞株中mKmRna水平最高。故后续试验以BGC823细胞为模型。图1中期因子基因熔解曲线
2.2siRna转染对胃癌BGC
823细胞mK基因mRna和蛋白水平的影响定量pCR和免疫荧光结果显示，siRna转染组细胞中期因子mRna以及蛋白水平明显下降，且呈浓度和时间依赖性(p
2.3中期因子基因siRna转染对胃癌细胞黏附力的影响
结果显示，与Cona对照组比较，mKsiRna转染组细胞黏附明显受到抑制，且呈浓度依赖性(p
2.4siRna转染对BGC823细胞侵袭能力的影响
Boyden小室上室细胞穿过膜上matrigel到膜的下室面，其数量反映了细胞侵袭能力的大小。Boyden小室结果显示，与对照组比较，mKsiRna组穿过滤膜的细胞数明显下降，且呈浓度依赖性(p
3讨论
中期因子是肝素结合生长因子家族的成员。人中期因子基因定位于11p11.2，由5个外显子和4个内含子组成。其启动子区域有视黄酸反应元件，因此视黄酸可诱导胚胎瘤细胞系和某些组织中期因子的表达。成熟的中期因子是一种分泌性蛋白，在妊娠中期胎儿组织中分布广泛，出生后表达水平降低。在正常成人组织中，中期因子在小肠黏膜高表达，在甲状腺中度表达，在肺、结肠、胃、肾及脾组织中微弱表达，而在肝脏完全不表达。
近年来研究发现，中期因子高表达于多种人类恶性肿瘤，如乳腺癌、食管癌、结直肠癌、肝癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、恶性胶质瘤、神经母细胞瘤和wilm′s瘤等。本研究采用荧光实时定量pCR方法检测4株胃癌细胞中期因子基因表达，发现BGC823细胞中期因子表达最高。进一步以BGC823细胞为模型，采用中期因子基因siRna转染该细胞后，分别以荧光实时定量pCR和免疫荧光方法检测，结果显示，转染组胃癌细胞mKmRna和蛋白水平明显下调，且呈时间和浓度依赖性。
癌的侵袭与转移是一个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程。其中细胞黏附和侵袭是关键步骤。本实验通过Rna干扰技术下调胃癌BGC823细胞中中期因子基因表达，并观察癌细胞黏附和侵袭力的变化。结果显示，中期因子基因表达下调后，癌细胞黏附和侵袭力明显下调，且呈浓度依赖性。
本研究结果提示，中期因子基因在人胃癌细胞黏附、侵袭中发挥着重要的作用，以该基因为靶点开展胃癌的靶向治疗，将会有助于胃癌的综合治疗。
参考文献
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高中数学逆袭方法篇5
【摘要】目的：探讨血管内皮生长因子165(VeGF165)基因对胃癌细胞侵袭性的影响及可能机制。方法：通过体外培养人胃腺癌细胞BGC823，观察胃癌细胞转染VeGF165基因对其迁移能力及侵袭相关分子mmp2、upamRna表达的影响。应用millicell小室分析VeGF165转染前后胃癌细胞迁移能力的变化；逆转录聚合酶链反应(RtpCR)研究VeGF165转染前后BGC823的mmp2、upamRna表达变化。结果：迁移实验结果显示adVeGF165组胃癌细胞迁移能力高于adGFp组及对照组［(212.0000±10.1488)vs(142.6667±14.5028)and(148.3333±7.5718)，p
【关键词】血管内皮生长因子165;胃癌;侵袭；迁移实验；基质金属蛋白酶2;尿激酶型纤溶酶原激活物
胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，淋巴结转移、血行转移和腹膜种植转移是其最常见的转移方式，预后较差。阐明胃癌细胞侵袭转移的机制，可以为胃癌侵袭转移的早期诊断和靶向治疗提供理论基础。近年来人们已经在人和动物的胃癌组织中发现血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VeGF)的过度表达，且其过度表达与肿瘤的侵袭、转移密切相关。为进一步了解VeGF能否通过自分泌途径增强胃癌细胞BGC823的侵袭力及其机制，故设计本实验。本实验通过体外培养人胃癌细胞BGC823，观察BGC823转染VeGF165对其迁移能力及对侵袭相关分子基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinases2，mmp2)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinasetypeplasminogenactivator，upa)分泌的影响，旨在进一步探讨VeGF在胃癌侵袭转移中的作用及可能机制，对胃癌转移和复发的早期诊断及靶向治疗有重要意义。
1材料和方法
1.1材料
人胃腺癌细胞株BGC823购自中国科学院，复制缺陷型腺病毒(ad)重组体adVeGF165及对照病毒ad绿色荧光蛋白(GFp)由南京医科大学第一附属医院构建并赠送，Rpmi1640低糖培养基购自美国Gibcobrl公司，胎牛血清购自杭州四季青公司。trizol试剂及RtpCR试剂盒购自日本taKaRa公司，pCR引物由上海英俊生物技术有限公司设计并合成。
1.2方法
1.2.1细胞培养BGC823用含有10%胎牛血清的Rpmi1640培养液于37℃、5%Co2饱和湿度的培养箱中培养，以0.25%胰蛋白酶消化后进行传代，一般1～2d传1代，1瓶接种2至3瓶，隔日更换培养液继续培养。
1.2.2病毒转染实验分成对照组、adGFp组和adVeGF165组等3组，以细胞浓度为2.0×105ml-1分别取3ml接种于3个培养瓶(50ml)中，于60%～70%细胞贴壁时吸出原培养液，对照组加入无血清无抗生素Rpmi1640培养液3ml，后两组加入相应的无血清无抗生素Rpmi1640培养液稀释的病毒液3ml转染［在前期试验中已经测得ad的感染复数(moi)值在20的时候达到最佳的感染效果，本实验moi值与前期实验相同］。8h后换含10%胎牛血清的Rpmi1640培养液继续培养36h，对转染前后的细胞行部分生物学特性研究。
1.2.3millicell小室细胞体外迁移实验分别收集对照组、adGFp组和adVeGF165组细胞，用0.25%胰酶消化后，使用无胎牛血清的Rpmi1640培养液洗涤细胞3次，制成单细胞悬液，细胞浓度为1×105ml-1。将millicell小室放入6孔板中，下室中加入1600μl含10%胎牛血清的培养液，上室加入无胎牛血清Rpmi1640培养液稀释的单细胞悬液100μl，每组细胞设3个复孔，置于37℃、5%Co2的细胞培养箱中培养8h，取出滤膜，用95%酒精固定细胞，然后行He染色，轻轻用棉签擦净小室上室面无侵袭性的细胞，显微镜下每张滤膜随机取5个视野，计数穿膜细胞数，取平均数表示每组肿瘤细胞的迁移能力。
1.2.4RtpCR检测VeGF165转染前后BGC823的mmp2、upamRna表达变化分组仍为对照组、adGFp组和adVeGF165组，按前述方法培养及感染细胞后进行逆转录。按trizol一步法提取细胞总Rna，无Rnase水配制的电泳缓冲液及琼脂糖凝胶电泳测定Rna的完整性。Rna电泳可见3条带，分别为28、18、5S亚基，28S与18S荧光强度之比为2∶1，说明Rna完整。按RtpCR试剂盒说明行逆转录反应获得细胞总cDna，取3μlcDna行目的片断Dna扩增。pCR引物序列及扩增片段长度见表1。mmp2的反应条件：94℃预变性2min；94℃变性30s，50.4℃退火30s，72℃延伸1min，32个循环后再于72℃延伸10min。upa的反应条件：94℃预变性2min；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸1min，32个循环后再于72℃延伸10min。因所选pCR扩增基因时选用的片段长度为230、324bp，故选用的内参照是扩增产物片段长度为641bp的β肌动蛋白(βactin)。βactin反应条件：94℃预变性2min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，32个循环后再于72℃延伸10min。pCR产物立即进行2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭显色，剩余产物-4℃冰箱保存。电泳时用的是600bp的marker。pCR产物进行电泳后，紫外检测仪下观察Dna扩增情况，用imagemasterVDS扫描分析仪扫描凝胶图谱，采用Labimage图像分析系统(LabimageVersion2.7.1)进行半定量分析，测量区带密度，计算样品的目的区带与内参区带的密度比。实验重复3次。
1．3统计学处理
实验结果中计量资料以均数±标准差表示，均数间比较采用t检验。所有数据均采用Stata9.1统计软件进行分析，p
2结
果
2.1迁移实验实验结果
每个小室随机抽取5个视野，计算每个视野的细胞总数。结果发现，adVeGF165组胃癌细胞穿过微孔膜的细胞数明显高于adGFp组及对照组(p0.05;2）与adGFp组和对照组比较，p
2.2RtpCR检测BGC823的mmp2、upamRna表达
mmp2、upa在3组细胞中均有表达。mmp2mRna在3组的表达分别为:对照组(0.3803±0.0254)、adGFp组(0.4096±0.0668)、adVeGF165组(0.6646±0.0486)（图2）。adVeGF165组的mmp2mRna的表达水平明显高于对照组和adGFp组，差异有统计学意义(p
3讨
论
VeGF是一种多功能的细胞因子，在血管形成及肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。肿瘤细胞可以合成、分泌VeGF，在多种肿瘤细胞上都有VeGF受体的表达［1］。VeGF家族中包括VeGFa、VeGFB、VeGFC、VeGFD、VeGFe和胎盘生长因子六大成员，通常所说的VeGF即是指VeGFa。有研究表明，胃癌患者血浆VeGF的水平显著高于正常人。胃癌患者血浆VeGF水平与胃癌分化程度、有无区域淋巴结转移和有无远处转移有关。胃癌分化程度较差、有区域淋巴结转移和有远处转移的患者，血浆VeGF水平有显著性增高［2］。Kondo等［3］研究了胃癌部分切除术后病人80例，用免疫组织化学方法测VeGFC和VeGFa蛋白表达，VeGFC和VeGFa阳性表达率分别为75例(93.8%)和41例(51.3%)，VeGFa表达与肿瘤分化(p=0.0017)、血管侵犯(p=0.0004)明显相关，VeGFC阳性表达只与肿瘤分化有关系(p=0.0168)，然而VeGFC和VeGFa同时表达者淋巴结转移率明显增加(p=0.036)。而且，两者同时表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、淋巴管和血管侵犯明显相关。Zhang等［1］报道在RF1、RF48、aGS1、nCin87、nCiSnU1、nCiSnU5、nCiSnU16和KatoⅢ等8个表达有VeGF121和VeGF165的胃癌细胞株中，有6个同时表达FLt1和KDR;而细胞株nCiSnU5仅表达FLt1，KatoⅢ既不表达Flt1也不表达KDR，免疫组化显示胃癌组织中Flt1和KDR阳性表达率高达84.6%(44/52)及70%，且外源性的VeGF以剂量依赖的方式刺激KDR阳性细胞株nCin87和aGS1生长，但对KDR阴性的KatoⅢ细胞株则没有作用。该研究提示，VeGF可能通过旁分泌和自分泌途径促进胃癌细胞的生长。
为此，我们利用ad作为载体将VeGF165基因导入BGC823，检测VeGF165对其侵袭能力的影响，在前期实验中我们已将腺病毒重组体adVeGF165进行扩增、纯化后转染胃癌细胞株BGC823，证实adVeGF165成功导入BGC823后促进了该细胞的VeGF及VeGFR2的表达，并证实其对胃癌细胞的促增殖作用［4］。本实验利用前期制备的高滴度adGFp和adVeGF165cDna，并按moi=20最佳转导率对胃癌细胞进行转染。迁移实验结果显示，adVeGF165组细胞的体外迁移能力明显高于adGFp组及对照组，而adGFp组及对照组之间比较无明显差异，说明VeGF165能够促进体外培养的BGC823的迁移。
为再次确认VeGF基因转染增加胃癌细胞的侵袭性及其机制，我们应用RtpCR检测了转染VeGF165基因前后侵袭相关分子mmp2和upa的mRna表达水平。肿瘤细胞浸润扩散过程中细胞基膜是一道天然屏障，肿瘤细胞必须要穿过细胞外基质和基膜屏障才能进一步侵入脉管、侵犯神经或肌肉。在肿瘤细胞侵袭、转移的过程中，降解和破坏细胞外基质是关键步骤，基质金属蛋白酶在这一过程中起重要作用。mmp2是基质金属蛋白酶家族中重要成员，是参与细胞外基质的主要成分Ⅳ型胶原降解的关键酶，对细胞外多种基质均有降解作用，在肿瘤细胞的浸润和转移的分子机制中扮演着极其重要角色。upa系统不仅能直接降解细胞外基质中大多数糖蛋白及蛋白多糖的蛋白核心部分，还能激活另一重要的基质降解系统基质金属蛋白酶系统，加强胶原、弹性蛋白等的降解，并与纤溶酶一起促使细胞外基质和血管基质降解，促进肿瘤侵袭和转移［5］。我们的实验结果显示，在3组BGC823细胞株上均检测到了mmp2、upa的阳性表达，且adVeGF165组阳性表达率高于对照组和adGFp组，说明VeGF基因水平的增加可上调mmp2、upa的mRna表达。这些结果进一步证实，VeGF基因对肿瘤生长和转移的促进作用除了通过血管机制以外，也有对肿瘤细胞的直接作用。可以认为VeGF在胃癌的侵袭性和恶性潜能方面的作用机制，部分是由于促进mmp2和upa的生成，进而促进肿瘤细胞外基质和血管基质降解而实现的。
VeGF与mmp2、upa三者之间的相互作用关系尚未明确。我们的实验提示，VeGF基因水平的增加可上调mmp2、upa的mRna表达。Shin等［6］在研究尼古丁对胃癌血管生成及肿瘤侵袭的实验中发现：侵袭和转移过程中重要的细胞因子mmp2、mmp9活性及纤溶酶原激活物pa（upa及其受体）的蛋白表达可被VeGF受体抑制剂降低。Sounni等［7］研究认为，mmp2与VeGF在肿瘤发生、发展中可能存在协同作用。Belotti等［8］认为，在卵巢癌中mmp9和mmp2诱导VeGF释放。进一步阐明VeGF与mmp2、upa三者间作用关系，对深入探讨VeGF在胃癌侵袭中的意义及作用机制，早期诊断胃癌转移、复发及其靶向治疗有重要意义。
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高中数学逆袭方法篇6
王军因在“琼瑶诉于正抄袭案”中担任琼瑶的律师而为人所知――他为后者打赢了这场长达19个月的笔墨官司。
“名作家维权尚且如此困难，更不用提这些普通的网络作家了。”王军对《t望东方周刊》说。
王军指的是“《锦绣未央》抄袭案”。就在不久前，这部热播剧的原著《庶女有毒》被指抄袭了200余部网络小说，有网友评论：“搞不懂影视公司为什么会买下这种作品的改编权。”
编剧余飞发起众筹，宣布资助相关网络作家进行维权。被《庶女有毒》作者秦简侵权的11位网络作家委托律师团，就原著涉嫌侵犯小说著作权事宜在北京市朝阳区人民法院进行，2017年1月4日已正式立案。
“必须跟抄袭党死磕，这样的案例多来几个，风气自然会有所好转。”网络作家猫腻对《t望东方周刊》说。而净化市场环境的同时，网络文学的“精品化”则更是任重道远。
“反抄袭”比“治盗版”更难
其实早在2013年，《庶女有毒》就被曝抄袭，秦简之后宣布封笔，加入了于正工作室。一年后，于正编剧的《美人制造》被曝涉嫌抄袭网络小说《邪恶催眠师》，而《美人制造》后半段剧情的编写者周静，正是秦简的本名。
与琼瑶一样，《邪恶催眠师》作者周浩晖选择了用法律手段进行维权，但数月之后，传来的却是其败诉的消息。
相比于治理盗版来说，网络作家想就抄袭侵权事宜进行维权难度要更大，而难就难在界定上。
作为一种通俗的类型文学，网络文学本身有一定的模式化特征，北京大学中文系副教授邵燕君对《t望东方周刊》说：“它要迎合大众的阅读欲望，写作方式上必然会有大量套路。”
文学创作中存在合理的“援引旧例”，那么如何判定一部作品是“抄袭”还是“借鉴”？
王军透露，侵权是否成立取决于多个方面，在人物关系设定、情节桥段因果关系等创作维度，有足够具体的证据，才有可能胜诉。抄袭者在拼凑和借鉴之间打法律的“球”，无形之中加大了取证的难度。
这意味着被抄袭者要耗费大量的时间精力和经济投入来取证。于是，很多被抄袭者忍气吞声，而抄袭者还能手捧抄袭之作坐享其成。
在这种情况下，对抄袭现象极度不满的网络读者形成了一股“民间力量”，他们组成反抄袭组织，利用搜索引擎工具自制“调色盘”，将涉嫌抄袭的作品逐字逐句“检查”，与其他作品比对，出现相同或相似的内容则在表格中标成同一颜色。
《庶女有毒》的抄袭行为，便是一支名为“言情小说抄袭举报处”的民间网络组织用“调色盘”悉数揪出的。“我们之前以为秦简只是复制了好词好句，哪里想得到她把别人的情节改几个字就拿来用了。”该组织的一位网友说。
“调色盘”将抄袭行为曝光，无疑会让抄袭者的信誉度染上污点，但并不意味着能够阻断抄袭者获取利益的渠道。
抄袭者们借助影视改编的大潮，还是获得了可观的经济利益，尤其是在行业“囤积ip”的粗鄙化作业阶段。从这个层面上讲，某些ip开发者在专业性上的不足，给抄袭者留下了生存空间。
让侵权成本比维权成本更高
“相比之前，网络文学越来越受到政府和学界的关注与认可，网络作家维权的底气也更足了。”王军说。
整体来看，近年来国家对知识产权侵权行为的惩罚力度正在逐步增强，而著作权法是版权保护的主要法律依据。
据悉，著作权法正在经历第三次修订，这也是迄今为止该法最全面的一次修订。鉴于目前网络文学是盗版、抄袭和改编不当等侵权现象的“重灾区”，此次修订将维护网络文学知识产权当作重要板块，正在完善相关法条。
网络文学的发展已经成为新世纪以来最为人瞩目的本土文化现象之一，网络文学创作者们也逐渐赢得了主流社会的认可。也正因此，网络文学的种种侵权乱象才引起了政府的格外关注。
在11名网络作家控告《锦绣未央》原著涉嫌侵权的案件中，余飞和汪海林等著名编剧发起的声援和众筹活动，无疑让维权的网络作家们有了更多信心。
在猫腻看来，想要杜绝抄袭，“网站自我审查非常困难，道德方面的批评最是无关痛痒，最终仍要落在司法上”。
从ip产业链下游入手成为另一个思路。由于网络文学和影视、游戏产业联系越发紧密，猫腻认为可以强化事后惩罚的概念：“购买抄袭作品版权的影视公司及游戏公司都应该付出足够的代价，继而让这些公司通过授权合同把压力转到抄袭者的身上。”
“如果对诚信失范视而不见，整个行业也难以独善其身。”有业内人士认为，抄袭问题的根源其实是网络文学行业以及下游的影视产业缺乏诚信约束机制。
在消费升级的经济格局下，内容消费市场正在快速成长，只有形成良好的市场秩序才能把蛋糕做大，这个道理是显见的，但在具体实践中，一些从业人员却有意“视而不见”。
很多制片方甚至认为改编的原作涉嫌抄袭也无关大雅，因为这些作品有争议，自带热点话题，反倒省了不少宣传费。
“言情小说抄袭举报处”针对《庶女有毒》的行动曾被秦简粉丝公开举报，该组织成员表示这种情况很多：“你无法叫醒装睡的人嘛。”
“消费内容以这些粉丝为主力，承认抄袭就是‘背叛’替你说话的粉丝，这时就真赚不到钱了，至于那些举报你抄袭的人，也不再是你赚钱的对象。”一位业内人士说。
这就解释了为何抄袭者在被法院判决“需公开道歉”后，交付了赔偿也仍“嘴硬”。
那么，抄袭者所付的经济赔偿金又有多少呢？据王军介绍，最著名的于正抄袭琼瑶案里，败诉方于正交了500万元赔偿金，已是很高的数额，而于正本人靠抄袭作品获得的编剧稿酬就有1000万元。
保护原创者权益是行业具有持续创新力的基础，只有侵权成本比维权成本更高，抄袭的经济账才不再划算。当这成为了行业共识，整体的市场氛围才会自然驱赶抄袭者。
不在于篇幅更大，而在于写得更好
抄袭案件频发的背后是一种危险信号：网络文学发展至今，在商业化和工业化生产模式下很可能陷入创作瓶颈期。
写作是智力劳动，如果作者只凭个人天赋和有限的知识储备，缺乏积累与学习，创作力枯竭便会是必然。之后，轻则借助所谓的“小说写作软件”进行流水化创作，重则迫于商业利益直接拼凑、抄袭。
虽然成熟的资本运营推动了网络文学发展，但其负面影响在“水面之下”。邵燕君表示，最近两年，随着资本的注入，特别是ip改编的流行，“很多新的写作者面对的诱惑更多了”。
自2013年起，国家互联网信息办公室多次组织“净网行动”，网络文学中的色情内容被大范围清理。与此同时，“ip热”也有积极作用，它在大趋势上带动了产业升级，于是，行业对网络文学创作质量也有了更高要求。
网络作家烽火戏诸侯对《t望东方周刊》说，过去作者面临文学网站的合约会有更新速度和字数的压力，但是如今作者的收入“不在于这部作品写了多少字，而在于作品有没有改编价值，这直接要求作者把这一部作品写得更好而不是篇幅更大”。
2016年7月，50余家文学网站负责人和网络作家代表了《网络文学行业自律倡议书》。这意味着，除了监管部门的外部治理监督，网络文学行业也开始自主自发地在产业勃兴的当下走向行业自律。
“顶尖‘大神’的文章恰恰是三观最正的，很多当年靠博眼球红起来的作品，很快就没有人看了，这种作家也被这个圈子淘汰掉了。”烽火戏诸侯说。
而在入行15年的猫腻看来，网络文学的整体质量其实还没有本质变化，不过，因网络文学作品基数远大于当年，优秀作品的数量还是有可观增长。
有网友曾总结网络小说有“穿越、霸道总裁、捡到异宝、X丝逆袭”等套路，并抱怨：“常常看了开头就猜到了结尾。”
那么，套路化写作又会否使网络文学堕入缺乏创新力的窠臼？
邵燕君认为，这种僵化的“套路文”不是引领方向的作品：“所谓的‘大神’级网络作家，总会在种种套路的基础上形成自己的独特风格，有变化，这样才能成‘神’。”
整体来看，网络文学的类型虽多元，但吸引流量和资本的主流依然是玄幻、修仙等类型，由于网络文学的创作生产机制与市场紧密结合，这种形势在短期内不会有太大改变。
“作家会多样化，会分流。”邵燕君认为，网络文学巨大的生产空间，还是留给了小众类型的作家上升渠道和培养粉丝的机会，这也会自然带动网络文学各个类型的发展。
未竟的精品化之路
自2014年5月首发于创世中文网，猫腻的《择天记》已连载两年半。接受本刊采访当天，正好是猫腻没有更新的日子。
“今天的《择天记》有更新吗？没有。续假一天，抱抱。”这是猫腻在自己的微信公众平台上给粉丝的留言。
通过十余年的勤奋写作培养起来的百万计忠实粉丝，让猫腻的撒娇与淡定有了充分的理由。不更新的时候，他会选择与粉丝互动答疑，或是读书会友。
作家与粉丝之间的良性互动，是网络文学内部生产机制的重要特征。作家和读者的共同成长，与付费制度一起，促使作家保持写作和提升水平。
猫腻精致的写作风格也博得了专业评论家的赞许。邵燕君便是猫腻的“学术粉丝”，在2015年度腾讯文学奖颁奖辞中更称赞猫腻的写作“代表了目前中国网络类型小说的最高成就。”
在纯文学稍显式微的时代里，逆势生长的网络文学的确已受到“传统战线”的诸多关注。
2016年9月，第二届全国网络文学论坛除了网络作家，也汇聚了一批学者，以及网络文学评论家。不过，在影响网络文学发展的诸多因素之中，文学评论所发挥的作用还偏弱，主导力量是市场经济法则。
“网络文学的精品化是大势所趋。”烽火戏诸侯说。这种情势下，网络文学评论体系亟待建成，与网络作家、市场进行互动和砥砺。
因此，邵燕君对网络文学进行了多年跟踪研究与调查，她希望与自己的研究团队在未来写成一部《网络文学发展史》。
另一边，继浙江、上海、广东之后，江苏、湖北等省市成立网络作家协会，作为各省级作协的下属机构，成为沟通网络作家、传统作家、知识精英和国家政策的桥梁。
2016年12月27日，国家新闻出版广电总局《全民阅读“十三五时期”发展规划》，将网络文学作为“全民阅读”的重要环节，提出“用3至5年时间，使创作导向更加健康，创作质量明显提升，在网络内容建设和文艺创新中的作用更加突出”。
“如果生态好的话，作家也会觉得自己的身份得到了足够的尊重。如果大众阅读付费习惯更好，作家也不会‘注水’。”邵燕君认为，政策、舆论与市场等外部因素的改善将有利于网络文学的精品化和多样化。
高中数学逆袭方法篇7
很难想象，这位平易近人的青年，有着那样多的头衔――首届全国高等职业教育毕业生就业创业之星、福建省闽侯校园绿洲信息技术有限公司董事长、福建省老区教育扶贫星火工程创业培训专业委员会执行主任、福州格联创业投资管理有限公司首席执行官等等。
也许，这是由于聂君锋来自农村，少时贫苦，是一个标准的丝，如今逆袭后仍然保留了先前的简朴。
这逆袭路，聂君锋走了整整十年，他感慨道：“我原本只是一个平凡的农家娃，怀揣着信息富农的梦想一路走到今天，结缘于中国电信，成就了今天的聂君锋。”
抗住命运的少年
1982年，聂君锋出生于福州闽清偏远贫困山区，家有父母和弟妹共5人。聂君锋在家里排行老大，母亲身体不好，只能靠父亲打点零工维持生计。穷人家的孩子早当家，为了减轻父亲的负担，从很小就开始，懂事的聂君锋便跟着父亲上工地帮忙，搬搬砖头，抬抬水泥，清瘦的小身体发起力气来，小脸蛋都涨得通红。
然而，就算这样的生活也没能维持多久。聂君锋念初二的时候，父亲在一次工地事故中受伤，身体受损严重，再也不能干重活……少年的肩膀要承担起家庭的重担，从那时起，“奋斗改变命运”的想法便镌刻在聂君锋心中。
“小时候很好动，不爱读书，反倒干过几乎全部的农活。十五六岁的时候，也干过油漆工，上公路卖冰棍。”为了生存，聂君锋什么都做，也暗暗地憋足了劲，要改变自己的命运。
“知识改变命运”，他开始意识到读书的重要性。随后，聂君锋一边下田干农活，一边用功读书，短短的一年时间，便从150名开外，直窜到30名以内，参加市县的数学竞赛也屡屡获奖。因为表现突出，高中时他便光荣地加入了中国共产党，成为了为数不多的学生党员。
人生不如意十之八九，哪怕聂君锋如此努力，但高考这桩“生意”，他还是“赔”了。考虑到家里的情况，他决定放弃读大学的机会，在高中毕业的暑假，只身一人来到福州打工。
初来乍到，他在一家油漆店当起了业务员。由于工作卖力，招来了其他同行的嫉恨，他们对聂君锋三番五次地警告，还威胁说不让他继续做，要把他赶走。矛盾不断积累，最后以一场群架收场，结果聂君锋被打伤，只好回家休养。
家人不忍，卖了好几担稻谷，东拼西凑了3000多块钱，让他重返校园。聂君锋还是孤身一人，却坚信前途是光明的。
而道路，只能靠他自己去探索。
逼出来的创业路
未曾想，3000元钱不但不够交学费，住宿费、课本费、生活费等各种费用更是没有着落。
命运再次将聂君锋推到了十字路口。
既然来了，岂可轻易言退？他壮着胆子给系主任打了个电话，表示将在两个月内将所有钱交齐。
可钱，从哪里来呢？
在其他同学忙着逛街娱乐的时候，聂君锋却躺在床上冥思苦想。有天晚上，聂君锋绞尽脑汁在想他的赚钱之法时，一位师兄来他宿舍推销电话卡，聂君锋像发现新大陆似的从床上跳了起来，一个念头在他脑海里闪过：“我也卖卡去。”
从一张小小的电话卡开始，聂君锋开始了他的创业之路，也开始了他的逆袭之旅，命运从这里拐弯。
2004年9月，刚毕业两个月，聂君锋就辞去了稳定的工作，与另外两个同学一起踏上了创业之路。当时，没有资金，又没有自己产品的聂君锋在商家的支持下，做起了兼职购物旅游一卡通业务。
创业之路充满荆棘。一个学期后，三个合作伙伴中的一个女生离开了团队，过了一个学期，另外一个男同学也离开了。队伍散了，路在何方？可最穷的时候，聂君锋仍在坚持，哪怕只能用电热杯熬稀饭，配点糟菜。
命运是一条长河，在别人拐弯的时候，聂君锋仍然向着前方奔腾。而前方等待他的，仍然是激流险滩。2005年，龙王台风肆虐，聂君锋店内的产品都被雨水冲走了，这差点成为压倒聂君锋的最后一根稻草。丝逆袭的传奇总需要些贵人相助，聂君锋命中的贵人叫“中国电信”，他们及时派遣人员帮助聂君锋进行灾后重建。
“我是一个特别感性的人，很容易被感动，在我最困难的时候，电信给我了帮助，这促使我毫不犹豫地加入到电信队伍中。”一场龙王台风，刮走了聂君锋的产品，却也让他和电信结下了不解之缘。
命运的大门，就此敞开。
吃水不忘打井人
之后5年，聂君锋不断摸索出校园信息服务提供的盈利模式，做到了以校园信息服务提供促进电信各项业务发展，也以每半年一家的速度，帮电信发展了12家天翼连锁专营店，一家信息服务有限公司，回馈电信的恩情。
与此同时，聂君锋也将目光投向了与他有相似经历的年轻人身上。也许，没有人比一个曾经的丝更清楚，丝们对逆袭的渴望。中国电信拉了聂君锋一把，而他希望为更多人打开那扇门。
2008年，通过校企合作，“校园绿洲大学生自主创业计划”正式启动，聂君锋带领多位母校毕业生组建了福建省闽侯校园绿洲信息技术有限公司。福州职业技术学院授予该公司“学生创业实训基地”；中国电信福州分公司和闽侯分公司同时授予该公司“校园绿洲创业基地”。通过“校园绿洲大学生自主创业计划”平台，聚集了社会多方的力量，智领大学生自主创业，重点帮扶革命老区青年就业创业成长。
“如果有种模式，可以帮助他们通过自身努力，顺利完成学业，同时还能够让他们走上创业之路就好了。”经过苦思冥想，聂君锋结合电信业综合信息服务提供战略转型的机会，对接中国电信与福建省老区教育扶贫星火工程创业培训专业委员会平台，共同筹建老区大学生就业创业帮扶中心。
目前，首个“老区大学生创业孵化园”已经在福州大学城正式运营，聂君锋关注的焦点仍然是他成长的农村。
如今，而立之年的聂君锋更加清晰地知道自己想要什么。他联手中电信、中节能、新时代等大型国企，共同启动了“农家新时代创业计划”，旨在“帮扶农家走向新时代，让城市家庭体验新农家健康生活”。
“以前，北大学生卖猪肉很稀奇，社会舆论也一边倒地认为这样是对人才的浪费。实际上，农村很需要这样的一群大学生来建设新农村。我自己就是一个农村山区出生的孩子，对农家、农村，有着与生俱来的喜欢，家门口的池塘干净清澈，可以游泳。信息富农，通俗点说，就是通过移动终端，让城市的孩子能够看到地瓜是怎么长出来的？兔子是怎么吃草的？让农村的孩子看到电影院是什么样的？迪斯尼乐园有什么好玩的卡通玩具？拉近城市孩子和农村孩子之间的差距。”提到信息富农，聂君锋给我们生动地描绘了一幅美好蓝图。为了更好地实现信息富农，聂君锋在电信的平台上建立了UeYBC高校微创业模式，该模式被收录到高等教育出版社出版的《大学生职业规划和发展系列教材》中，作为大学生成功创业案例进行全国推广。
回首往事，聂君锋非常感激一个人――他的创业导师兼朋友――一个多年从事老区教育扶贫事业的热心人士。“在他的帮助下，让我有机会对接老区星火工程平台，在老区创业教育扶贫的这几年时间里，我深受许多老革命老先辈的熏陶。他们生在战争年代，经历过抗战时期的艰辛，比我们这代人更爱国，更懂得革命志士的不易。我们经常会在一起交流，他们经常回忆起那个火红、激情燃烧的年代。我自己本身就出生在一个农民家庭，早年因为家庭困难，几乎干过所有的农活，也喜欢研究一些农业技术，当时一个最朴实的想法，就是想怎么样通过信息技术来带动农民致富。后来，和电信的合作，让我的这个梦想有了实现的可能，老区革命前辈的言传身教，让我明确了信息富农的服务对象，可以说，我的爱国情怀是在这个时期被高度燃烧起来的。”
改革开放让一部分人先富了起来，如今，从农村走出并且已经成功逆袭的聂君锋希望，农村的年轻人也能富起来。
高中数学逆袭方法篇8
[关i词]雌激素受体；乳腺癌；miR-27b；他莫昔芬；HmGB3
[中图分类号]R737.9[文献标识码]a[文章编号]1673-7210（2016）12（c）-0058-05
[abstract]objectivetoinvestigateregulationmechanismofmiR-27binepithelial-to-mesenchymaltransitionandtamoxifensensitivityofeRpositivebreastcancercells.methodsqRt-pCRwasperformedtodetectmiR-27bexpression.DualluciferaseassayandwesternblotassaywereperformedtodetecttheregulativeeffectofmiR-27bonHmGB3expression.tamoxifensensitive（tamS）andtamoxifenresistant（tamR）mCF-7cellsweretransfectedwithmiR-27bmimicsorHmGB3siRna.thencellviability，theexpressionofepithelialandmesenchymalmarkersandcellinvasionweremeasured.ResultstamRmCF-7hadapproximately20%ofmiR-27bexpressioncomparedtotamSmCF-7cells.miR-27boverexpressionsignificantlyenhancedthesuppressiveeffectof4-hydroxytamoxifenoncellviabilityintamRmCF-7cells.miR-27boverexpressionsignificantlyinhibitedcellinvasioninbothtamSandtamRcells.intamRmCF-7cells，transfectionofmiR-27bmimicsresultedinapproximately3foldsincreaseofe-cadherinand70%decreaseofn-cadherin.miR-27bcouldbindtothepredictedbindingsiteinthe3′UtRofHmGB3anddecreaseHmGB3expressionatproteinlevel.KnockdownofHmGB3phenocopiedtheeffectsofmiR-27b.ConclusionmiR-27bcaninhibitepithelial-to-mesenchymaltransitionandsensitizeeRpositivebreastcancercellstotamoxifenviatargetingHmGB3.
[Keywords]eR；Breastcancer；miR-27b；tamoxifen；HmGB3
他莫昔芬与雌二醇竞争结合雌激素受体（eR），广泛应用于eR阳性乳腺癌术后的辅助治疗[1-2]。虽然他莫昔芬的临床运用显著提高了患者的生存期，但乳腺癌细胞通常会在一段时间治疗后出现他莫昔芬耐药，导致肿瘤复发和治疗失败[1，3]。
研究发现，乳腺癌细胞获得性他莫昔芬耐药通常伴随多种miRna的异常表达[4-6]。如4-羟基他莫昔芬（4-oHt）处理后，eR阳性的乳腺癌mCF-7细胞中miR-574-3p表达降低，导致了网格蛋白重链异常升高，从而参与了他莫昔芬耐药[7]。乳腺癌细胞中miR-320的降低可以通过增加camp调控的磷酸蛋白（aRpp-19），雌激素相关受体γ及其下游效应分子的表达，包括c-myc和细胞周期蛋白D1，导致获得性他莫昔芬耐药[8]。有研究指出，miR-27b低表达也与乳腺癌细胞获得性他莫昔芬耐药密切相关[9]。但miR-27b在乳腺癌细胞中的下游调控机制还不是很清楚。本研究拟探讨miR-27b/HmGB3调控轴对eR阳性乳腺癌细胞上皮间质转化和他莫昔芬敏感性的作用。
1材料与方法
1.1细胞培养
eR阳性且他莫昔芬敏感（tamS）的乳腺癌细胞mCF-7购自美国atCC细胞库。采用低剂量逐步加量法诱导他莫昔芬耐药的（tamR）mCF-7细胞。肿瘤细胞用Rmpi-1640培养基培养，添加10%FBS，2mmol/L谷氨酰胺，100U青霉素/mL和100μg链霉素/mL。
1.2细胞转染
miR-27b模拟物（mimics），HmGB3si-Rna（si-HmGB3）和对应的阴性对照购自锐博生物。参考转染试剂Lipofectamie2000（invitrogen）说明书进行转染。
1.3生物信息学预测
使用targetScan7.1预测miR-27b和HmGB3的结合位点。
1.4Rna提取及实时荧光定量
按照tRizolRna提取试剂盒说明书提取细胞总Rna。应用taqmanmiRna逆转录试剂盒（appliedBiosystems）将Rna逆转录为cDna。用taqmanmiRna分析试剂盒检测miR-27b的表达。所有qRt-pCR实验均使用appliedBiosystems7500实时定量pCR仪进行。Rna的相Ρ泶锪渴褂2-ΔΔCt法计算。
1.5细胞活力检测
取转染miR-27bmimics或HmGB3siRna后24h的tamS或tamRmCF-7细胞，接种于96孔板（3×103个细胞/孔），继续培养24h。之后，将培养基换为5μmol/L的4-oHt培养基。细胞继续培养72h后进行CCK-8检测细胞活力。
1.6transwell侵袭实验
将基质胶铺于小室底部，小室下层加入含10%小牛血清的Rpmi1640培养液500μL，上层加入无血清的Rpmi1640培养液100μL。转染48h后，制备细胞悬液，小室上层铺500μL的细胞悬液（含1×105个细胞），继续培养24h后，4%甲醛固定、0.1%结晶紫染色后在显微镜下（100×）随机挑取10个视野计数穿膜的细胞计算其均数和标准差。
1.7蛋白质印迹分析
细胞样品应用蛋白质提取试剂盒提取总蛋白，BCa法测定蛋白质浓度。蛋白样品按30μg/孔在10%SDS-paGe进行电泳分离，转膜，封闭。后用相应一抗于4℃孵育过夜，洗涤。加二抗孵育，洗涤。加入增强型化学发光试剂，X线曝光、显影和定影。以目的蛋白质条带的灰度值与内参β-actin蛋白条带灰度值的比值表示目的蛋白的相对表达水平。
1.8双荧光素酶报告实验
将含预测的野生型miR-27b结合位点的HmGB33′UtR序列片段和含突变型miR-27b结合位点的HmGB33′UtR序列片段分别插入荧光素酶报告质粒pmirGLo（promega）的Xhol和Xbal位点之间。重组质粒分别命名为pGLo-HmGB3-wt和pGLo-HmGB3-mt。将miR-27bmimics、mimics对照分别与内参对照和荧光素酶报告载体共转染入mCF-7细胞中。转染24h后，采用promega公司的Dual-LuciferaseReporterassaySystem进行样品Luciferase活性检测。
1.9统计学方法
采用SpSS18.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，两组间比较采用t检验，以p<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1miR-27b对eR阳性乳腺癌他莫昔芬敏感性和侵袭力的调控
tamRmCF-7细胞中miR-27b的水平约为tamSmCF-7细胞的20%（图1a）。5μmol/L的4-oHt处理并不能抑制tamRmCF-7细胞的活力；但在tamRmCF-7细胞中过表达miR-27b后，5μmol/L的4-oHt处理则导致约15%的细胞活力抑制（图1B）。tamSmCF-7与tamRmCF-7细胞在miR-27b过表达后，穿膜细胞数目均明显减少，差异有统计学意义（p=0.028、0.006）（图1C、图1D）。
2.2miR-27过表达对乳腺癌细胞上皮间质转化的影响
蛋白质印迹分析结果证明，tamRmCF-7细胞中，miR-27b过表达增加了约3倍的e-cadherin表达，降低了约70%的n-cadherin表达（图2）。
2.3miR-27b对HmGB3在乳腺癌细胞中表达的影响
生物信息学结果显示，在HmGB33′非翻译区有一个可能的miR-27b结合位点（图3a）。在tamS和tamRmCF-7细胞中，过表达miR-27b可以降低HmGB3蛋白表达（图3B）。为了进一步验证miR-27b是否与预测的HmGB33′UtR结合位点有直接结合作用，将野生型和突变型的HmGB33′UtR片段插入pmirGLo荧光素酶表达载体后进行miR-27b结合实验。结果显示，miR-27b可以显著抑制pGLo-HmGB3-wt的荧光素酶在tamS和tamRmCF-7细胞中的表达，但是并不能抑制pGLo-HmGB3-mt的荧光素酶表达（图3C、图3D），说明miR-27b可以结合预测HmGB33′UtR结合位点。
2.4HmGB3敲减对乳腺癌细胞的影响
HmGB3siRna显著抑制了HmGB3的表达（图4a）。tamRmCF-7细胞在抑制HmGB3后，5μmol/L的4-oHt处理导致了约20%的细胞活力抑制（图4B）。抑制HmGB3也显著减少了tamS和tamRmCF-7细胞穿膜细胞数目（p=0.009、0.004）（图4D）。HmGB3siRna显著增加了e-cadherin表达，同时也明显降低了n-cadherin表达（图4C）。
3论
研究发现，多个miRna在tamR乳腺癌细胞中表达显著下降，包括miR-497，miR-221/222，miR-195和miR-27b[10]。miR-27b可以参与多项乳腺癌病理发展过程。如miR-27b表达下降与erbB2依赖的乳腺上皮细胞癌变和侵袭力增强密切相关[11]。miR-27b表达降低也导致了enpp1激活，从而参与了乳腺癌肿瘤干细胞的发生[9]。在多种肿瘤细胞中，miR-27b低表达也与癌细胞的化疗敏感性相关。如miR-27b过表达可以在胃癌细胞中激活p53依赖的细胞程序性死亡，减少CYp1B1调控的药物减毒作用，从而增加肿瘤细胞对多种化疗药物的敏感性[12]。在乳腺癌细胞中，miR-27b过表达可以通过减少侧群细胞的形成，从而降低获得性的药物耐药[9]。
上皮间质转化不仅是肿瘤细胞获得更强侵袭力的重要机制之一[13]，也是获得性他莫昔芬耐药的重要机制之一[14-15]。如果在他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞中恢复一些下调的miRna的表达，如miR-375和miR-200，可以部分逆转乳腺癌细胞的上皮间质转化，并增加他莫昔芬的敏感性[14-16]。本研究发现，在他莫昔芬耐药的mCF-7细胞中恢复miR-27b的表达，可以显著增加他莫昔芬对细胞活力的抑制，减弱肿瘤细胞的侵袭力，同时也部分逆转了肿瘤细胞的上皮间质转化。
人高迁移率族蛋白（HmG-box）在肿瘤细胞的Dna复制、转录、重组和修复中有重要的生理功能[17-18]。在乳腺癌中，HmGB3是一个原癌基因，并且可以调控肿瘤细胞的增殖、转移和耐药性[19-20]。本研究证实，miR-27b可以结合预测HmGB3的3′UtR结合位点，降低HmGB3的表达。HmGB3敲减具有类似miR-27b过表达的生物学功能，可以减弱乳腺癌细胞的他莫昔芬耐药性，减弱细胞侵袭力，也部分逆转了癌细胞的上皮间质转化。因此，HmGB3很有可能是miR-27b在乳腺癌细胞中的重要下游靶点。
本研究只用了一种他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞，这是本研究的局限性。后续研究拟用多种乳腺癌肿瘤细胞系和基于裸鼠的体外肿瘤模型对miR-27b和HmGB3的作用机制及参与的信号调控网络进行深入研究。
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高中数学逆袭方法篇9
毛泽东思想里很重视农民，外来的马克思主义和本土的中国化马克思主义一个非常大的区别在于：中国国情使得工人阶级队伍总体数量偏少。早期中国共产党还是以城市为中心，发动工人暴动。后来在毛泽东的一力主张和努力下，中国共产党改弦易张，以工农为核心(但其实就是以农民为基本盘)。
2、粉丝经济
与西方大量的党派所不同，共产党特别注重纪律，重视党员个体和组织的密切关系。孙中山一开始搞革命，屡败屡战屡战屡败，苦苦思索原因，最终发现一个奥秘：国民党不够团结。
于是他以俄为师，请来了苏联人来重新造党。这一点上，中国共产党与苏联共产党一脉相承，个体和组织的关系非常密切，信仰非常重要，在信仰之下，党员对共产主义有粉丝情结。唯有此，党的力量才是坚不可摧的。
3、价值观
这三个字不仅仅出现某些公司文化，还出现某些互联网产品。产品要有价值观，这其实是一种人格化的方式。
互联网产品基本都是由代码组成，代码本身并无价值观、左中右。但在产品经理、研发人员的摆弄下，产品拥有了价值观，就拥有了灵魂，俨然可以无往而不利。党也特别强调价值观，价值观这个问题一旦混淆了，那就会引发路线斗争。
4、刚性需求
国民党其实没有满足“用户”需求，三民主义太过漂浮。所谓二十八个半布尔什维克跑来也是大谈一通理论，被毛泽东斥之为“教条主义”，形容为比翔还不如的东西。
中国共产党在反对国民党统治中，使用的就是充分满足农民需求的口号：“打土豪分田地！”简单易懂，而且打中刚需。农民以土地为本，能分田地，不是刚需满足是什么。
5、接地气
有了得农民得天下，再加上满足农民刚需，共产党不接地气谁接地气？
毛泽东在《论人民民主专政》一文中这样写道：“孙中山的四十年革命是失败了，这是什么原因呢？在帝国主义时代，小资产阶级和民族资产阶级不可能领导任何真正的革命到胜利，原因就在此。
我们的二十八年，就大不相同。我们有许多宝贵的经验。一个有纪律的，有马克思列宁主义的理论武装的，采取自我批评方法的，联系人民群众的党。”不接地气怎么联系人民群众！
6、逆袭
中国共产党一直很弱小，抗战胜利后还是比国民党弱小。国民党陆海空三军430万人，共产党军队127万人，还清一色是陆军。共产党高层鲜有富二代官二代，被国民党鄙视为“一帮泥腿子”。
无论是“以农村包围城市”，还是“星星之火可以燎原”，都充满着逆袭味。中国共产党的奋斗史和成功史可不就是一部鲜龙活跳的逆袭？
7、一切以用户为中心
这被很多公司奉为口号和宗旨，有一家公司做得更有些意思，不仅成天把用户挂在文宣里，还在自家门口大树一块“为人民服务”的招牌。
细细想来，一切以用户为中心，和为人民服务，表述不同，理念一致。关键的是，如果你不用我家产品，就不是我用户，不是我用户，有啥好和我啰嗦的。人民二字，道理亦然。
8、互联网武功唯快不破(快速迭代)
快是什么？就是赶紧着，赶紧出产品、赶紧圈地、赶紧整用户，慢了就来不及了。互联网竞争激烈，怎样才能赶紧？这个不重要，别空发议论，实务动手撸起袖子干，快点上是正经。一朝百万用户在手，英雄不问出处。白猫黑猫，抓到老鼠才是好猫。至于旁的议论，“燕雀安知鸿鹄之志哉”！
9、极致
极致这个词，一下子冲破了东西方都曾奉行的一种思想。东方谓之“中庸”，西方谓之“精神美德处于两个极端中的合适位置”(亚里士多德)。
毛泽东思想是不讲中庸的，还曾经一度大批立场有失鲜明的中庸之道。共产主义追求一个极致美好的世界，物质极大丰富，精神极其高尚，每个人——注意，是每个人，都很happy。
10、大数据(云计算)
计划经济作为一种试验，不得不说，失败了。但计划经济的失败不是理念的失败，而是操作的失败。一个热点来了大家一哄而上，显然对资源有所浪费，最终产生资本主义经济危机。计划经济就是要避免这个，生产消费要“计划”。
这件事在过去由于缺乏可行性最终失败，但有了以云计算为依托的大数据之后，数据采集可以更全面更有时效性，连一个人睡觉的深度睡眠有多久都可以通过设备来传至网上形成数据，有什么还是不可以规划的呢？老外都著书论证人类社会有95%行为可预测，计划经济将大有前景。
11、平台(闭环)
毛泽东曾就中国革命提出三大法宝：武装斗争、党的建设和统一战线。和平年代，武装斗争是用不上了，党的建设和价值观、粉丝经济有关，至于统一战线，那就是“开放平台”。为了一个共同的目标，团结一切可以团结的力量建设统一战线，与开放平台何其相似。
当然，统一战线所谓“可以团结的力量”，随着时代演进要求不同。最新要求是四项基本原则，这是一套“闭环”，核心所在，不容动摇。开放平台必须有自己的闭环，完全意义上的开放。
高中数学逆袭方法篇10
但伴随时代的发展，种种现象似乎表明，高考促进社会成员的升迁性社会流动的功能减弱了，高层次的教育并不必然带来好的收入和职业地位。高考改变命运”的口号不再像过去那么令人信服。
某报曾在几年前致高考毕业生中写道：“从书本走向社会，从记诵教条走向活色生香的现实，你不妨多问几次：这个时代究竟发生了什么？为什么？根源在哪里？多问为什么，这便是人格独立的起点与途径。”
他们虽然被名校拒之门外，但是没有放弃倾听时代的脉搏，所以在计算机、互联网、移动互联网等行业崛起的时候，先于他人找到机会。程维、王兴和张一鸣，这三位年轻人创办的滴滴、美团、今日头条，恰恰是这拨移动互联网热潮中最大的三个赢家。
我一直有一个观点，即创业是最后的阶层上升通道。这一观点也为数据所证实。
根据最新的海银财富与胡润研究院联合的《中国高净值人群资产配置白皮书》的调研，目前国内个人可投资资产1千万元人民币以上的高净值人群规模已超100万人，全国个人总体持有的可投资资产规模达到112万亿元人民币。这其中，企业主占了一大半。
其他高净值人口包括，投资者（房产、股票）、企业金领。但社会阶层不仅考虑财富规模，还要看社会资源和社会声望，考虑到这两个因素，创业几乎成了逆袭的唯一通道。
1978年、1992年、2001年
在中国市场经济改革之前，国人的阶层上升通道和传统社会差不多，主要是依靠高考。
自隋炀帝在大业三年（607年），开科取士，到光绪三十一年（1905年）废除科举，千百年来，底层社会与帝国庙堂之间，始终有着读书这样一个上升阶梯，对于维护社会稳定，保证社会活力，有着极其重要的意义。
1905年废除科举之后仅6年，满清即宣告崩溃，史家历来有一观点，认为光绪废除了青年精英的“中国梦”，将士子与士绅推向了革命，加速了封建王朝的衰竭。
辛亥之后，大佬胡汉民就说过，“如果科举不废，谁还来革命！”事实上只要社会还给精英留有出路，按照正常的人性来计算，没有人会愿意去做刀口舔血的革命生意。
此后中国在内忧外患下饱经沧桑，一直到1977年邓小平20分钟内决定恢复高考，此后数十年间，社会活力有目共睹，无数底层青年有了翻身的机会。
如今福布斯富豪榜中的财富精英，如王健林、许家印之辈，都是在1978年参加高考，完成了人生的关键一跃，如今长期盘踞于各类富豪榜的前十。
1992年，市鼍济地位的确立，更是开放了自由竞争的空间，在传统仕途之外，给与青年精英一条高耸入云的上升阶梯。
这个时期的创业热潮，丝毫不亚于今天，高级公务员下海者比比皆是，统计说1992年辞官下海者凡12万人，社会价值观是“最优秀的人应该从商”。以致现在企业家群落中，有“92派”之谓，一大批政治精英在上升空间受挫之后，在商界取得了不俗的成就。
而在民间，则有浙江草根商人自成一脉，偏安于京师千里之外，上承数千年民间商帮基因，下接经济改革带来的消费红利，很快在消费品、轻工、外贸领域占据潮头，以宗庆后为代表的这脉商人，纯粹以草根起家至今依然是各类富豪榜的主力。
2001年则是又一个新的分水岭。两件大事决定了财富的流向，以及今天各路精英的命运。
其一是中国入世，经济腾飞；其二是互联网开始流行。
一方面，入世带来的经济效应让上一波完成原始积累的富豪，财富飞速增值，而在这个食物链的下游，也有无数国人尝到了财富自由的滋味。
另一方面，互联网造就了张朝阳、丁磊这些新贵，互联网开始发芽，并逐渐侵入普通人的日常生活。马云、马化腾、李彦宏们随后爆发，Bat霸业初成。
2008年、2012年
事情在2008年之后起了很大的变化，无数的潘壳嗄晖蝗环⑾郑逆袭越来越难。
这一年，中国经济发展模式走到了一个拐点，整个经济领域都缺乏新引擎。
民间经济的活力开始下降，外企和小型民企日子越过越紧，风光不再。
我身边的社会精英，则在房贷、教育、医疗这三座大山的压力之下，结结实实感受到生活之重。
更要命的是，职场上留给刚毕业小鲜肉的机会也越来越少，原因也很简单，起点已经明显不再公平。
这一代年轻人遇到的新问题就在于，他们的父辈经过改革开放三十年的浮沉，已经进入了不同阶层，当子女辈进入职场之后，父荫和家族的提携，直接决定了自己在职场中的起点和未来。拼爹已经不是公务部门的个别现象，而是泛滥至外企和民企的普遍现象。
换而言之，普遍存在的起点不公平，使得高考（科举），已经不再是阶层流通的显性通道。
实话实说，2008年之后毕业的大学生是很苦逼的。一方面，北上广深的房价高企，很难想象这些年轻人能够靠自己的工资解决房贷；另一方面，缺乏上升的想象空间，也会让年轻人觉得比较苦闷，没有盼头。
以致到2012年，一个名叫“潘俊钡耐络脏词席卷中国，这当然是一种自嘲，承认自己无力回天，认命式自娱，回应这个缺乏光荣与梦想的时代。
很多年以后，我们回顾2012，会发现无数公司在这一年奠定了自己的霸业。无论是滴滴、美团、今日头条，还是雷军的小米，都是在这一年奠定了坚实的基础。伴随着这一轮的财富效应或曰“风口”，潘棵侵沼谟辛舜息的机会，前方看到了一丝亮色。
当高考不再成为唯一的阶层上升通道时，另一道大门被打开了。以互联网为代表的新经济通道，是一个纯粹市场化，起点也很公平的崭新阶梯。
就像高考一样，勤奋是创业的前提
勤奋怎么可能无用。无论是企业家还是中产，哪个阶层不是勤勤恳恳，而对于底层，勤奋更是最后的资本，如果将之抛弃，就真得认命了。
所谓“勤奋无用”无非指一个人努力了半天，却没有达到预期效果。这时候，当事人应该首先检讨自己的方法，看自己是不是在蛮干，如果是在蛮干，再努力也不会成功。跌倒并不可怕，可怕的是跌倒后说根本就不走路。
再者，宣扬“底层只能认命”是极端不负责任的，因为心理学认为一个人对自己的预言往往会成真。一个人如果认定自己这辈子属于底层，他将从此自暴自弃，一定会成为底层，甚至将这种心态传染给子女，从而世代贫穷。
而一个底层青年如果认定自己不属于底层，他就会想办法脱离底层，只要能找到正确方法，他一定能脱离底层，实现阶级跨越。
宗庆后出身于一个南京国民政府的小职员家庭，中考时因“家庭成分”不好无法报考师范学校，从此在杭州的大街小巷卖煮红薯和爆米花。但宗庆后始终不认为自己命该如此，1987年，42岁的他承包了一家严重亏损的校办企业，之后努力经营，建立了娃哈哈集团，并三度成为“中国首富”。
这样的故事非常普遍。福耀集团董事长曹德旺小时候家里很穷，14岁辍学放牛，15岁跟着父亲卖水果、贩烟丝，是一个苦闷的底层青年。但他不认命，四处寻找机会，并勇于行动，结果到1975年就积累了6万多元，那时候连“”都没有结束！改革开放后，他又创立福耀集团，生产出享誉世界的汽车玻璃。截至2016年底，他累计交税127亿元，捐款高达80亿元。
像宗庆后、曹德旺这样在一穷二白的基础上逆袭成功的创业者还有很多很多，每一代都有。有种观念认为改革开放前30年是逆袭的好时候，现在留给底层的创业机会已经很少了，而事实是，现在的投资环境和市场需求都比前30年更好，更有利于创业。
贫穷并不可怕，可怕的是在贫穷面前表现得颓废和软弱。
创业就是把人证券化
如今，创业成为一个全民现象，于是在认知上也出现了极端现象。
一种是年轻人容易把创业想象成暴富的捷径，看到无数的财富神话之后，总觉得自己也是不可一世，各种咖啡馆都能听到估值、VC这些江湖黑话，而实际上第一次创业的成功率不会超过10%。
一种是老人心态总觉得创业就是不靠谱，还是在大公司呆着安心，却忽视了今天的安全区就是明天的危险区，温水煮青蛙的心态，会导致在信息和产业快速迭代的今天，个人很快就会失去竞争力。
实际上，做成一家百亿美金的上市公司，永远是运气成分居多。但如今在传统经济见顶，新经济和产业升级机会层出不穷的年代里，机会仍然相当之多。
就我个人的理解，创业的本质是投资自己，把创业者个人的专业技能和人脉资源证券化。在创业公司股权的流动性大大增强之后，创业者的个人财务问题会很容易解决，这比在大公司打工带来的收益要高得多。
创业是最后的阶层上升通道
现在，我们大约可以下两个结论。
第一，高考（科举），大约只能让年轻人勉强组建小康之家，但随着上代人权力和资本的积累，后续年轻人的上升通道越来越窄；
第二，创业是最后的阶层上升通道，而且这个通道并不会随着互联网红利的消失而消失。
最后，顺便反驳一下两个关于创业的流行论调。
其一，有人说，现在是资本寒冬，创业就是泡沫。
就我个人感受，所谓的资本寒冬，只是在B轮、C轮这些亿元级投资比较受影响，而在天使和a轮阶段的公司，这种效应并不明显。我或者朋友参与的公司，几乎全部完成融资，或者自己有足够的收入根本不需要融资。
当然，创业肯定是一个九死一生，成功率极低的行当，要知道王兴、张一鸣这些人，以及更早的马云、马化腾也都不是第一次创业就成功。如何理性的认识创业，学习创业的方法论，是另外一个话题。总而言之，逆袭很难，但总好过没有逆袭的机会。
其二，有人说，创业是政府在推卸就业责任，互联网泡沫已经到头了。
其实就业这个问题本来就跟政府没半毛钱关系。宏观经济固然在下降通道，政府鼓励创业也有确然有解决就业的动机，但从大的经济基本面看，传统经济的饱和，以及互联网、消费升级引领了新经济空间，就基本确立了创业成为这一代青年精英的上升通道。
事实上目前仍然是资本过剩，全球范围内优良资产都匮乏的局面，在这样的情况下，行业精英在新经济领域创造全新的产品，建立全新的商业模式，实在是时势推动的必然。
中国的经济改革有一个特点，就是存量不动，用增量改革推动经济发展。从1978年小岗村的农业试验，到2015年互联网金融的网开一面，都是这种“试点经济”的现实实践。只是今天的变革者，不需要像小岗村的农民那样，提着人头谈改革。
在可以预见的数十年中，存量的传统经济领域，利益格局很难撼动，阶层流动的通道正在收窄。而增量改革的空间依然很大，包括金融、医疗、教育、农业等领域都在逐渐释放政策红利，里面依然孕育着大量的创业机会，上述每一个领域都是万亿级的市场。
可以想见，在很长一段时间内，各个领域的创业红利都会当作一种隐形的国民福利交给一代代的青年精英。他们在为自己创造财富的同时，也驱动着各种经济引擎，为社会带来活力，让国家更为健康。
让青年精英对国家和未来保有希望，类似科举制度留给古代士子的机会，这是政治未能开放之时，留给这一代年轻人最后的阶层上升通道。
一代人有一代人的机遇和挑战
很多人认识到了时代的巨变，也想成为新世界的一员，但却表示客观环境对自身非常不利，没有办法实现逆袭。主要的抱怨有两种：
一种抱怨是老一代企业家赶上了好时候，改革开放初期，只要胆子大、敢创业，很容易成功，因为竞争少，而现在是大众创业，竞争者到处都是，要想胜出极其困难。
这种说法听上去有道理，但却不是事实。改革开放初期的创业者在绝对数量上或许比现在的少，但那时候的需求和投资也少，而且竞争者不见得更少。
比如80年代末，许连捷依靠安乐卫生巾在行业内迅速出头，结果刺激全国出现了四五千家卫生巾厂，花王、金佰利、强生等跨国巨头也趁势进入中国，许连捷面临的竞争压力陡增。追涨杀跌是人的本性，稍微赚钱的行业都会涌入大量竞争者，一个创业者能不能胜出取决于自身实力，而非竞争者的数量。
此外，老一代企业家所面临的竞争环境比现在的要糟糕得多，有时连竞争的资格都没有。
1980年，鲁冠球带队参加全国汽车零部件订货会，推销自己生产的汽车传动轴与驱动轴的连接器――万向节。不料，他们却因为“乡镇企业”的身份被拒之门外。
但鲁冠球没有抱怨，而是在会场外摆起摊位，同r派人到会场内打探消息，对比别家产品和自家产品，分析客户心理。后来他发现客户对价格很敏感，便以低于场内20%的价格出货，一举斩获210万元大单。
不公平竞争还是小事，有时还要面临无端的法律风险。
1986年，曹德旺与福清高山镇政府合办的异形玻璃厂生意红火，但曹德旺却因此陷入到一场官司。当时，镇领导班子里的一些人举报曹德旺有“经济问题”，而且“十分严重”。这些人被性情耿介的曹德旺得罪过，非要告倒曹德旺，他们先是在镇政府告，不成又告到福州市，不成再告到福建省、中纪委，最后被北京的领导大吼“胡闹”！
今天的创业者基本不用再面临这样的不公平竞争和法律风险，只需要把产品和服务做好。并且中国市场的竞争没有媒体鼓吹的那么激烈：一方面，我们的市场体量巨大。
另一方面，很多行业几乎没有展开真正的竞争，都在扎堆做那些最低端、最容易的活计，有一些行业甚至还在靠忽悠赚钱。创业者应该致力提升行业竞争水准，实现消费升级，而不是抱怨低端竞争者太多了。
一代人有一代人的机遇，也面临一代人的挑战，抓住机遇、应对挑战是每一代创业者的生命主题。试想，假如鲁冠球当年灰心丧气地退出展会，假如曹德旺当年打完官司后甩手不干了，他们和他们的家族今天会是什么样的命运？
另一种抱怨是当前经济形势不好，“资本寒冬”已至，“英国脱欧”和“特朗普上台”恶化了外贸环境，国内楼市的暴涨则挤压了实业投资，并推高了各项成本……总之，生意没法做了。
巴菲特的合伙人查理・芒格说，“宏观是我们必须承受的，微观才是我们能有所作为的地方。”当前的经济形势当然不好，但它不是对你一个人不好，对你的竞争对手也不好，而这种不好的经济形势会帮助你淘汰大量竞争对手，使行业内各要素（人力、设备等）的价格大幅下降，使你能够以更低的成本提升自身竞争力，获得更大的市场份额。
所以，创业者唯一要担心的是自己的能力够不够，而不是经济形势好不好。经济形势再好，也有破落户，经济形势再不好，也有成功者，就算打起仗来，也是有本事的当将军，没本事的当炮灰。对于个体而言，任何时代都有逆袭的机会，关键看你做什么以及怎么做。