药理学的研究方法篇1
论文关键词：血清药理学,中药脑脊液药理学,体外培养
上世纪80年代由日本学者田代真一在日本第一届和汉医药学会上首次提出的给动物灌服中药一定时间后，取其血清进行实验的方法，受到了医学界的广泛关注，并在其后的应用中，国内外学者很注重中药复方血清制备方法的研究。上世纪90年代开始，中药血清药理学在我国兴起。作为一种改良后的中药药理体外实验方法学，它使人们对于中药的评价系统产生了观念上的改变，尽管存在一定的争议，但此种方法的应用对于中药进行药理乃至药效学的研究都起到了至关重要的作用。近年来，随着中枢神经系统疾病日益成为威胁人类健康的重主要疾病，如以神经元病变为主的帕金森病和亨廷顿病，及以急性脑出血为主的急性脑血管病变等的发病率都在逐年增高，进而使得中药及其复方对于神经系统保护的物质基础及作用机制的研究日益兴起，脑脊液药理学这一概念随之被提出。
1.中药药理作用特点
1.1中药药理作用的多效性
黄芩一味中药的药理作用就有抗病原微生物、抗变态反应和抗炎、解热、抗氧化、抗肿瘤、调节camp等13项。
1.2中药药理作用的复杂性
1.2.1影响因素多
影响中药药理作用的因素有诸多方面，药物因素有药材、制剂、剂量和配伍等，机体因素包括生理因素、病理因素，此外还有环境因素等。药材的不同产地、品种、采收季节、贮藏条件、制剂的不同炮制工艺剂型、剂量、煎煮方法、复方的不同配伍、机体的不同体质、年龄、性别、情志、机体功能、环境的不同地理条件、气候等等对中药药效都有不同程度的影响。
1.2.2药效化学成分复杂
中药中即使是单味药材，其含有的化学成分也有几十种甚至上百种，譬如人参，更何况中药又多以复方用药，药效化学成分也极为复杂，有蛋白质、肽类、氨基酸、脂类、糖类、苷类、生物碱、单宁、甾体、酚类、醌类、挥发油、维生素以及微量元素等多种成分。
1.3中药药理作用双向调节性
中药的双向调节作用为同一药物对机体某一功能合适剂量时使之兴奋，超大剂量时使之抑制；或同一药物对机体若干功能，有的呈现抑制效应，有的呈现兴奋效应，麝香主要成分麝香酮小剂量可缩短戊巴比妥钠所致的小鼠睡眠时间，大剂量则使睡眠时间延长。表现为双向性影响。即小剂量兴奋神经系统，大剂量抑制。
1.4中药药理作用整体平衡性
中药及其复方种类繁多，功效复杂，但其基本作用为“扶正祛邪，调节平衡”，通过扶正祛邪来增强机体抗病能力，现代研究表明补益药，如：人参、黄芪等主要是通过增强机体的免疫功能，增强神经内分泌系统功能，尤其是下丘脑一垂体一性腺轴功能而产生扶正之功效。通过调整阴阳，调和气血使机体的各功能相互协调与平衡，如寒凉药能减轻或消除热证，温热药能减轻或消除寒证，补偏救弊，促进平衡是中药治疗疾病的根本法则之一。
2.中药药效作用机理的研究进展
2.1中药学清药理学
2.1.1中药血清药理学方法的优势和特色
中药药理学方法是在以前体外实验的基础上加以改进形成的，即以含药血清代替中药粗提物进行体外实验，它不仅具有体外实验的优点：如条件可控性强，可在细胞、亚细胞水平进行超微、生化、受体、基因等方面的研究；揭示药物作用机理较为深入，重复性好，使
用材料少等，而且有其更适合中药及其复方制剂研究的独特之处。因为中药尤其是复方制剂的化学成分极其复杂，经过体外的煎煮或其他制备过程，再经口服以后在体内发生一系列变化，有的是药物本身物质发挥作用，有的是经过肝脏代谢的产物发挥作用，有的是肠道细菌代谢产物发挥作用。因此，以中药的粗提物的体外实验结果来评价药物的体内效应是不客观的也是不确切的。以含药血清代替中药粗提物进行实验更接近药物在体内环境中产生药效的真实过程。
中药血清药理学方法优点如下：采用含药血清培养细胞可以直接观察中药的药物学效应，便于从微观阐明药物作用机理；利于用现代生命科学阐明中药复方配伍实质，便于观察和追踪药物的吸收和代谢过程，排除体外干扰因素影响，较清楚地认识药物活性成分和活性部位，为药物进一步开发提供依据。因而特别适用于中药及复方药理作用和化学成分的研究。
2.1.2中药血清药理学方法研究中的几个关键技术
血清药理学方法的问题主要集中在实验动物的选择、给药次数与时间、给药剂量、含药血清的采集以及含药血清的灭活等几个方面，其关键技术在于含药血清的采集、含药血清的预处理以及血清药理实验作用效应-剂量关系这3个方面。血清药理学在方法学上解决了中药复方提取物直接应用于离体实验的难点,可以研究进入体内的中药有效成分或其代谢产物的药理作用。
2.2中药脑脊液药理学
2.2.1脑脊液药理学方法的建立及优势
由于中枢神经系统血脑屏障的存在，使脑的内环境、神经元及神经胶质细胞生存的微环境与自身血液系统有着显著的不同,而且药物是否能透过血脑屏障已成为研究中药神经保护作用的关键;同时,由于血清中含有多种活性酶及蛋白,对神经细胞均有一定的影响。
梅建勋等、冯淑怡等的实验证明也了这一点，并发现利用含药脑脊液进行中药对中枢神经系统的药效观察明显优于血清药理学方法。基于上述原因,梅建勋等在研究中药复方对神经保护作用时,初次提出了脑脊液药理学的概念。在该研究小组随后的清脑益智方对谷氨酸损伤神经保护作用的实验研究中,正式建立了中药脑脊液药理学方法,即用含药脑脊液代替含药血清,研究中药及其复方对神经系统的保护作用，该实验结果显示：无论是正常血清还是药物血清均显现对神经元的毒害作用，对于观察中药的药理作用产生了障碍，而采用脑脊液则可以克服上述缺点。
脑脊液药理学优势主要有以下几个方面:一,中药及复方的化学成分,在生物体内经生物转化成活性成分,或代谢后失活,或没有被吸收入体内,或通过第2、3信使等信号级联反应间接起作用,这使得中药及复方的研究趋于困难;又由于化学成分或生物活性成分通过血脑屏障的数量有限;而脑脊液药理学的方法可以简化这种研究过程。二,脑脊液药理学排除了体外实验的各种干扰因素,可直接以观察中药及复方作用于中枢神经系统的药效学效应为导向,确证中药及复方药物中主要的有效成分及生物活性部分。三,血清本身内源性成分复杂,含有多种活性物质对神经细胞有一定影响;而脑脊液避免了血清本身的毒害作用所遮盖的药效作用。四,脑脊液药理学方法不但适用于口服给药的中药对神经保护作用研究,也适合于注射给药的药物研究。五,脑脊液药理学更解决了中药大分子能否通过血脑屏障的问题,在中枢神经系统的药效物质基础和作用机制研究中,更具有科学性、真实性、可行性。
2.2.2中药脑脊液药理学方法研究中的关键技术
脑脊液药理学的实验方法,是一种新兴的主要评价作用于中枢神经系统药物的药理实验方法学，其实验条件尚不十分成熟,还需要进一步完善。张启春等，通过观察当归芍药散精简方(FBD)含药脑脊液在不同条件下(给药方案、添加量、处理方法、批次及保存时间)对过氧化氢所致pC12细胞损伤模型的保护作用,对脑脊液药理实验条件规范化进行了初步探讨。而该方法的关键在于获得有效的含药脑脊液，其主要环节包括以下几方面：一,动物的选择,一般多选用大鼠、家兔、犬等动物来制备含药脑脊液,由于各种动物间存在种属差异,且脑脊液含量相对较少,采集比较困难。因此在采用脑脊液药理学方法时,一方面,应考虑制备脑脊液的动物应与获得离体细胞的动物相一致,从而缩小动物脑脊液间在理化、生物等特性上的差异,减少因种属差异造成的免疫反应;另一方面,根据实验的需求,确定含药脑脊液的用量。二,给药次数及给药剂量。大多实验研究通过增加给药剂量倍数来弥补实验时所稀释倍数;但是,含药脑脊液组和含药脑脊液冻干浓缩组比较,对β样淀粉蛋白所致细胞损伤研究显示,含药脑脊液冻干浓缩组保护作用较强,提示增加给药剂量不一定被动物吸收、分布和代谢等,这可能导致药效浓度与脑内产生效应的内环境存在差异所致。因此，为了使试验条件更接近于药物在体内产生效应的内环境,建议含药脑脊液的制备,可采用连续多次给药方案,无需灭活处理,一般以体外添加终体积的10%、-20℃保存、不超过30d为宜。三,脑脊液的采集方法及制备技术。准确的采集足量的含药脑脊液,是脑脊液药理学方法中至关重要的一步。富宏等,采用经皮穿刺延髓池抽取兔和大鼠脑脊液的方法;曹远东等，对比了两种采集SD大鼠脑脊液方法后，认为经枕骨大孔法简单易行，损伤小，并发症少，成功率高，优于经侧脑室法；李惠勉等设计了一种经颅钻孔开窗置管采集兔脑脊液的方法，此方法采集脑脊液量大且快速省时。
2.2.3脑脊液药理学的应用现状及前景
近年来，脑脊液药理学的应用主要集中在中药复方对防治脑血管疾病的作用机制的研究上,主要包括对海马神经细胞、皮层神经细胞、凋亡的抑制作用以及对pC12细胞、星形胶质细胞的保护作用以及星形胶质细胞CRL-2541活力和神经胶质纤维酸性蛋白GFap表达的影响等的体外观察。
脑脊液药理学方法为研究中药及其复方在中枢神经系统疾病的预防和治疗方面提供了新的思路及行之有效的途径，具有良好的应用前景。
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药理学的研究方法篇2
【关键词】生脉散;血清药理学;离体工作心脏
effectsofShenmaiSanonHemodynamicsinisolatedworkingGuineapigsHeartsbySerumpharmacology
abstract：objectivetoobservetheeffectsofShenmaiSanonhemodynamicsinisolatedworkingguineapigshearts.methodstheexperimentwasaccomplishedbyserumpharmacology.Differentigdosages(5，10ml·kg-1)wereadministeredtorabbitstwiceadayforthreeconsecutivedays.thebloodwastakenat60minafterthelastadministrationandtheserumwasseparated.theseparatedserumwasaddedtotheisolatedworkingguineapigshearts.theeffectsofShenmaiSanonheartrate(HR)，arterialbloodpressure(ap)，leftventricularsystolicpressure(LVSp)，leftventricularend-diastolicpressure(LVeDp)，and±dp/dtmaxwereobserved.ResultstheherbalShenmaiSanserumslowedHRandreducedap、LVeDp，increaseLVSpand±dp/dtmax(p
Keywords：ShengmaiSan;Serumpharmacology;isolatedworkingguineapigsheart
生脉散又名生脉饮，是中医益气养阴的著名古方，由人参、麦冬、北五味子组成。方中人参补肺益气以生津，为主药;麦冬养阴、清热以生津为辅药;五味子固表止汗而生津，为佐使药。以人参、麦冬、五味子三药一补一清一敛，益气生津，敛阴止汗，使气阴复而脉气生，因而后世将其作为“益心复脉”的基础方。近年来的众多研究显示其药理作用相当广泛，尤其对心血管系统作用的研究报道颇多，如正性肌力、抗心律失常、改善顽固性心衰、双向调节血压以及降低心肌梗塞后的死亡率［1］等。但用血清药理学实验方法来研究生脉散对豚鼠离体工作心脏血流动力学的影响尚未见报道。本实验旨在用豚鼠离体工作心脏模型，观察生脉散对豚鼠离体工作心脏血流动力学的影响，以探讨生脉散的药理作用机制。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1动物 豚鼠18只，雌雄不拘，体重300～350g，家兔，体重2.0～2.5kg，家兔和豚鼠购于湖北省实验动物研究中心。
1.1.2仪器美国BiopaC公司mp150型16道生理信号记录分析仪及插件。恒温循环水浴泵(北京医疗设备厂)。
1.1.3药品与试剂生脉注射液由江苏苏中药业股份有限公司生产（规格10ml/支，每10ml相当于红参、麦冬各1g;批准文号：国药准字Z32021054;批号：20031203)，其余各试剂均为市售分析纯。
1.1.4含药血清的制备家兔，体重2.0～2.5kg，分成3组，每组5只。第1组为对照组，灌胃nS10ml·kg-1;第2组生脉注射液低剂量组（含药血清低剂量组），灌胃剂量为5ml·kg-1，第3组生脉注射液高剂量组（含药血清高剂量组），灌胃剂量为10ml·kg-1。以上各组灌胃2次/d，连续3d。家兔末次给药前12h禁食，不禁水。末次给药后60min从耳缘静脉取血，3000r·min-1离心20min，分离含药血清，50℃灭活30min，于-40℃冷冻备用。
1.2方法
1.2.1制备豚鼠离体工作心脏［2］将豚鼠迅速脱臼处死，打开胸腔，取出心脏，经主动脉插管，用K-H缓冲液(naCl118mmol/L，KCl4.7mmol/L，CaCl22.5mmol/L，mgSo41.2mmol/L，KH2po41.2mmol/L，naHCo325mmol/L，Glucose11mmol/L，95%o2+5%Co2，37℃，pH7.4)先以Langendorff模式逆行灌注，然后于肺静脉行左房插管，以备顺灌。再向左室插管，用美国BiopaC公司mp150型16道生理信号记录分析仪及插件记录左室收缩压(LVSp)、左室内压最大上升及下降速率(±dp/dtmax)、左室舒张期末压(LVeDp)，主动脉插管记录动脉血压(ap)，于心房和心室安置电极以记录心率(HR)变化。心脏搏动稳定后改以前负荷1.17kpa，后负荷5.38kpa恒定状态顺向灌流心脏，按给含药血清后3，5和10min的顺序观察药物作用。
1.2.2动物分组 3组，每组9只动物， ①对照组(a)：将家兔对照组采血分离的血清给予豚鼠的离体工作心脏（以下各组含药血清在灌流液中的体积分数为4%）连续灌流；②含药血清低剂量组(B)：将家兔生脉注射液低剂量组采血分离的血清给予豚鼠的离体工作心脏连续灌流；③含药血清高剂量组(C)：将家兔生脉注射液高剂量组采血分离的血清给予豚鼠的离体工作心脏连续灌流。
1.2.3统计学处理 实验数据以±s表示，采用给药前后配对t检验。
2结果
在离体工作心脏搏动稳定后，按给含药血清后3，5和10min的顺序观察含药血清作用。含药血清在给药后不同时间均可减慢HR，降低ap和LVeDp，增高LVSp和±dp/dtmax，与给药前比较差异有显著性(p
表1含生脉散血清对豚鼠离体工作心脏血流动力学的影响（略）
与正常血清对照组比较，**p
3讨论
心脏的泵血功能取决于心肌的收缩性能以及前、后负荷的综合效应，反映心脏收缩性能的参数LVSp和±dp/dtmax在一定程度上反映心室壁肌张力变化，从而反映心肌纤维收缩成分的收缩程度，但这些参数在在体情况下，容易受前、后负荷以及神经、体液的影响，因而很难正确评价药物对心肌收缩性能的影响［3］。传统的Langendorff离体心脏灌流法排除了神经体液的调控作用，但不能同时控制前、后负荷［4，5］。而本实验则为顺向灌流，在前负荷固定在1.17kpa，后负荷固定在5.38kpa的前提下，灌流液依靠离体心脏工作来维持循环，所以能够在排除了前负荷和后负荷影响的条件下观察离体心脏的泵血功能与心肌收缩性能的变化［6］。
LVSp和+dp/dtmax代表等容收缩期左心室内压力及最大变化速率，在一定程度上反映心室壁的肌张力变化，从而反映心肌纤维收缩成分的收缩速度［7］。生脉散可使LVSp和+dp/dtmax增高，表明其可提高心脏的收缩性，因而使心脏收缩更敏捷，心室腔残留血量减少，心室壁张力降低，从而降低维持心室壁张力所需的耗氧量。-dp/dtmax代表等容收缩期左心室最大舒张速度，同时也是心肌早期舒张功能改变的敏感指标［8］。生脉散可使-dp/dtmax增高，表明其可提高心脏的舒张功能，因而使回心血量增多，心输出量增加。
本实验结果表明，生脉散含药血清对离体工作心脏血流动力学的影响表现为减慢HR，降低ap，LVeDp，增高LVSp和±dp/dtmax，且具有剂量依赖关系，表明含药血清的药理作用强度与动物的给药量呈显著的量效关系，提示生脉散具有正性肌力作用和负性频率作用，结果与以前学者的研究相一致［9］。
另外，对生脉散正性肌力作用和负性频率作用的报道至今均为体外实验或静脉直接给药所得结论。对有效成分并不十分确切的这一粗制剂经口给药后能否产生同样的活性尚未见报道。本实验采用生脉散给动物口服，取其血清进行体外实验，这样可排除其所含杂质成分包括无机离子的干扰。实验结果表明，含生脉散血清与生脉散制剂直接给药两者对心肌的正性肌力作用基本相似。说明其正性肌力作用和负性频率作用的有效成分确能经胃肠道吸收入血。
观察复方中药对器官的影响方法较多，但若用复方中药直接接触器官，其复杂的成分可影响实验的结果。而给动物灌服中药一定时间后，取其血清进行实验的药理学方法就具有一定的优势，近年来许多中药药理实验即采用此方法［10］。任何新的方法学都需经过一定的时间，在探索的过程中得以建立，在研究过程中逐步加以完善，逐渐推广应用，血清药理学方法作为一种新的方法也不例外，必然存在局限性及某些问题。如:血清标本采集时间的确定、含药血清药物浓度的测定与选择、血清的处理、不能保证中药全部通过血液而起作用以及中药尤其是复方复杂的药物代谢动力学及血清化学等，以上存在的问题在今后的研究过程中还有待逐步加以解决，以更好地促进中药药理的研究。
鉴于生脉散的有效成分极其复杂，故对其确切作用机制仍不明确，尚有待进一步研究。
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药理学的研究方法篇3
关键词:中药炮制；原理；研究
1研究内容
1.1文献整理及经验总结首先要搞清炮制的历史和现状。炮制的历史文献比较分散，现代的炮制经验多数是“师徒相传，口传心受”继承下来，各地遵循不一。每类炮制方法及每药的炮制方法的起源、发展和临床应用的关系更应进一步深入研究，分析其演变原因，找出其理论依据，探知其炮制目的所在，从中可以找出一些规律，提出科研思路，做到古为今用。因此，认真进行文献整理和经验总结，是开展炮制研究必不可少的一项基础工作。做这些工作时，应采用取其精华，去其糟粕的态度。
1.2炮制原理及炮制理论的研究炮制原理是指药物炮制的科学依据和药物炮制的作用，即探讨在一定工艺条件下，中药在炮制过程中产生的物理变化和化学变化，以及因这些变化而产生的药理作用的改变和这些改变所产生的临床意义，从而对炮制方法做出一定的科学评价。可见，炮制原理的研究是炮制学研究的关键问题。
中药炮制在漫长的实践中，结合中医药的理论，形成自己独特的理论，这些理论虽然不能作为定论，但大多有一定的临床意义，因而探讨那些规律性的本质，不但有利于炮制原理的阐述，而且将指导炮制方法的改进及创新。
1.3炮制方法的研究中药的种类很多，品种繁杂，各地炮制方法也不一致。炮制工艺多属于手工作坊生产，尚难适应现今工业化的生产，因此研究炮制技术，改进炮制工艺是当务之急。在今天，由于科学技术的发展，新技术的不断应用，很多新的科技成果又可供借鉴，在搞清炮制原理的基础上，以炮制过程的本质变化为核心，向炮制工艺的机械化、自动化方向发展，最大限度的利用药材，充分发挥药效，是完全可以做到的。
1.4饮片质量标准的研究同一种饮片由于生产条件和环节不同，质量差异很大，直接影响疗效。当前用以控制饮片质量的标准是各省、市自治区制订的中药饮片炮制规范，而规范中的标准多数是依据广大药工长期实践经验制订的，主要依据形态、色泽、质地、气味等感观来判断饮片的真伪优劣，比较模糊，不易掌握。为了保证临床用药的准确必须进行饮片质量标准的研究。首先要制订统一的炮制工艺及饮片的质量标准，然后应用现代科学手段逐步以客观化的指标感官控制的经验性指标加以结合，建立起更为合理的质量标准，以更好的控制饮片质量，确保临床用药的效果。
2研究方法
2.1应用文献学方法进行研究中药炮制源于古代，所以搞清炮制历史才能搞清炮制意图，才能有目的地研究各种炮制原理及其优点。历史上炮制技术变化很大，其中有合理的，也有不尽合理的，也有误传误用的，现代使用的炮制方法并不完全正确，只根据现行经验进行研究，往往不能反映炮制的原来意图，得不到正确的结论。所以通过文献学研究手段，搞清炮制历史的原始意图、炮制方法及其变化，这是炮制研究不可缺少的基础手段。
2.2应用实验药理学方法进行研究中药的临床研究由于受到复方用药和患者对象的制约，一般不易进行，加之很多中药化学成分研究还缺乏与药效的紧密联系，或者上属空白，因此开展实验药理学的研究是最现实的选择。应用实验药理学的方法研究中药炮制，最好选用适合中医病理模型的方法和指标来进行。在化学成分不清的情况下，通过实验药理学的方法来研究炮制前后的生物活性变化，可达到控制炮制质量和指导工艺改革的目的。
2.3应用化学的方法进行研究中药的疗效，是由其所含的化学成分决定的。中药经过炮制后，所含的化学成分的性质和含量会产生不同程度的改变，因而药理作用、临床疗效发生相应的改变，可见，研究中药在炮制前后化学成分性质和含量的变化是中药炮制研究的核心，它的研究结果不但能阐明炮制原理，而且能指导炮制工艺的设计和改进，也是制订质量标准的依据。
2.4应用临床疗效观察方法进行研究中药炮制是为中医临床辨证治疗服务的，目的是保证临床用药安全有效。经药理学、化学等方法研究中药炮制的结果，最终也必须接受临床效果的检验。由于临床研究影响因素复杂，不可能用临床疗效指标作为炮制方法优选的手段，而往往都在各项研究指标比较成熟的条件下以临床疗效观察作为最后验证的手段。在炮制研究中，一定要注意同一药物不同炮制品的不同功效，并设法用现代科学技术手段阐明其科学性，切忌暂时说不清就轻率否定其炮制意义和作用的做法。
2.5应用多学科结合进行研究中药炮制是一门知识面比较广泛的综合性学科，应尽可能借助其他有关学科的新技术、新成就，采取多学科的研究是开展中药炮制研究的有效途径。
药理学的研究方法篇4
【关键词】中药;药代动力学;方法学
药物动力学是应用动力学的原理与数学处理方法,定量地描述药物通过各种给药途径进入机体后的吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律,即研究给药后药物在体内的位置、数量、疗效与时间之间的关系。药物动力学又被称为“药物代谢动力学”、“药代动力学”等,其中“代谢”含义包括了药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄。药物动力学是一门新兴的介于药学与数学之间的边缘学科,已成为生物药剂学、临床药剂学、药理学、临床药理学、分子药理学、生物化学、药剂学、毒理学等学科的基础推动着这些学科的蓬勃发展。近几十年药物动力学的研究成果对指导新药研究、制定临床最佳给药方案、评价制剂质量、改进药物剂型等方面发挥了重要作用。中药药代动力学,其研究对象是中药及其复方,是指在中医药理论指导下,利用动力学的原理与数学处理方法,定量地描述中药有效成分、有效部位、单味中药和中药复方通过各种给药途径进入机体后的吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律。中药药物动力学对中药现代化和中药走向世界具有极为重要的意义。其研究方法大体可分为:血药浓度法和生物效应法两大类。同时随着中药药代动力学研究的越来越受重视,先进检测技术的不断增加,出现了一些新技术新方法,如临界流体萃取、在体微透析、核磁共振、生物电阻抗、细胞培养研究体外吸收模型、证治药动学[1]、中药血清药理学[2]、中药胃肠药动学等。下面就对常用的药代动力学研究方法进行简要介绍。
1血药浓度法
适用于有效成分比较明确的中药及其复方制剂,通过中药复方给药后,用现代分析仪器如气相色谱法、气-质联用法、高效液相色谱法或液-质联用等,分析生物样品中有效成分原型或代谢物,进行中药复方的体内成分分析、体内过程和动力学研究。目前用药物浓度法进行药代动力学研究已成为中药复方药代动力学研究的热点,近年这方面的研究报道很多。如报道大鼠口服黄芩汤后用HpLC法测定血浆中的多种成分:黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素a苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素a、芍药苷、甘草苷、甘草素、甘草酸、乌拉尔甘草次酸、paeonimetabolin-i(pm-i),再分别计算各自的药动学参数[3];用HpLC法测定大鼠口服甘草附子汤后血浆中乌拉尔甘草次酸的药动学参数[4];用Spe和HpLC法研究大鼠口服四物汤后血浆中白花素、芍药苷的药动学特征[5];用LC-eSi-mS法研究大鼠口服黄连解毒汤后血浆中小檗碱、巴马丁的药动学特征[6]。然而,在采用药物浓度法进行中药复方药代动力学研究中,尽管有些报道检测了复方给药后体内多种成分,再对每一种成分逐一进行动力学分析,从而避免了单一成分的药动学脱离了中医药整体观思想,但这些研究仍没有阐明多种成分与复方药效的关系,因此,这种多种成分的药动学研究也难以合理地阐明中药复方的药代动力学特征。中药复方药代动力学研究中,上述常用的药物浓度法也存在缺陷[7]。由于中药复方化学成分的复杂性、中药药效的多效性和中医临床应用的辨证施治及复方配伍的中医特色等特点,使得中药复方药代动力学研究有别于化学药品的药代动力学研究,而有其特殊性和复杂性[8]。
2生物效应法
适用于有效成分尚不明确的中药及其复方制剂。采用单一组分为指标,用体液药物分析方法求得的药动学参数代表中药整体的药动学有很大的局限性。20世纪80年代初期产生了以药效为指标进行药动学研究的理论和方法,主要包括毒理效应法、药理效应法和微生物指标法。这些方法体现了整体观,从而使中药药动学研究迈向了一个新阶段。
2.1毒理效应法该法分为急性累计致死率法及LD50补量法。急性累计致死率法基本原理是将药物动力学中的血药浓度多点测定原理与用动物急性致死率测定药物蓄积性的方法结合起来,即给多组动物不同时间间隔给药,求出不同时间体存百分率的动态变化,由此推算药动学参数。LD50补量法在急性累计致死率法基础上进行了改进,将第2次腹腔注射同量药物改为求测LD50(t)。其优点是结果更精确,误差小;但动物用量成倍增加,操作更加复杂。用此法进行药代动力学研究的有含剧毒药马钱子的九分散和疏风定痛丸,结果表明:兔体内,两者均符合一房室模型;马钱子在体内吸收迅速,而疏风定痛丸吸收较九分散慢,从而降低毒性和不良反应[9],为临床合理用此类中药提供了依据。刘延福等[10]研究附子理中丸在小鼠体内的药动学参数,结果表明:按一级动力学消除,呈二室开放模型。此法观察指标明确,实验操作简便,但只适用于药理效应和毒理效应是同一组分的中药。同时它以药物毒性为主要指标来反映药代动力学规律,不能代表有效量的药代动力学规律。
2.2药理效应法基本原理和方法是假定药物在体内呈线性配置,药物在作用部位的药量Q(t)与药物效应强度(e)存在函数关系Q(t)=f[e(t)],而Q(t)又与给药剂量(D)成正比。所以给药后某时刻生物相药量Q(t)与该时刻的效应强度e之间的函数关系便可以用给药剂量D与效应强度e的函数关系D=f[e(t)]来表示,建立“时间-效应曲线”,然后再变换为“血药浓度-时间曲线”,求出动力学参数。该法以越来越广泛地用于中药及其复方制剂地药动学研究中。如富杭育等[11-14]分别以解热、发汗、抗炎、抑制肠蠕动等药理效应为指标,研究了麻黄汤、桂枝汤、银翘散、桑菊饮等的药物动力学。卢贺起等[15]以血小板聚集抑制率为药效指标,研究了四物汤的药动学,结果表明:家兔经口服给药后体内过程符合一室模型,t1/2α=0.37h,t1/2β=0.4h。药理效应法研究中药复方药动学,更能体现中医药的整体思想,符合中医药的基本理论,是一极具发展前景的方法。但由于生物差异性,以及测定方法的准确度、精密度等限制,所得参数具有表观性;难于找到灵敏又准确地定量疗效的药理指标;而且由于所选药效指标的不同,测得的药动学参数差异较大。
2.3微生物指标法其原理主要是含试验菌株的琼脂平板中抗菌药扩散产生的抑菌圈直径与其浓度的对数呈线性关系。选择适宜的标准试验细菌菌株,可以测定体液生物样品浓度,计算药动学参数。王西发等[16]选用金葡菌为试验菌株,用此法测定了鹿蹄草素在兔体内的药动学参数。潘嘉等[17]以抑菌效应为指标,测定川芎挥发油药动学参数,符合一室开放模型。此法适用于具有或以抗菌活性为主要药效的中药制剂,有简便易行,体液用量少等优点。但特异性不高,测定结果包括具有抗菌活性的代谢物;机体内外抗菌效应作用机制的差异、细菌选择的得当与否、可在一定程度上影响药代参数的准确性。
3pK-pD模型、pB-pK模型的建立及应用
3.1pK-pD模型应用药物pK-pD模型[18]反应了药物浓度-时间-效应的三维关系,体现了特定时间内药物浓度与药效之间的关系,故能描述和预测一定剂量下药物的时间-效应过程。药物动力学(pK)解释的是“机体对药物的处置”问题;药效动力学解释的是“药物对机体的作用”问题,将二者分开研究所得到的信息并不全面和充分。与药效或不良反应密切相关的被测药物浓度随时间的变化过程是我们迫切需要掌握的信息,这样的pK研究才有意义;pD研究只涉及时间-效应关系,未涉及到效应室中药物浓度随时间变化的药效变化过程,实际情况中药效峰值出现时间常滞后于血药浓度峰值(药效与血药浓度之间存在逆时针滞后环),孤立的进行pK或pD研究不能阐明药物的体内过程,故有必要建立pK-pD结合模型,对药物的浓度-时间-效应关系进行估算,通过对靶部位药物浓度及药效的关联度分析,评估药物的体内过程。
3.2pB-pK模型应用血药浓度法和生物效应法目前占据了复方药动学研究的主导地位。pB-pK模型结构与生物体解剖结构大致对应[19],参数来自生理解剖资料和药物理化性质,pB-pK模型以生理解剖资料和药物理化性质为基础来分析药时数据,且有强大的种属间外推(interspeciesextrapolation)能力[20],所得参数更具有实际的生理意义,相比房室模型更有优越性和实用价值,可提供其他模型不能提供的参数(如药物在人体器官内的代谢速率常数、进入器官的弥散系数等等),故有必要加强中药复方的pB-pK模型研究以pB-pK模型参数提供更多有实际意义的参数为复方配伍规律进行参考。
4小结
目前中药药代动力学研究尚处于探索阶段。对中药药动学研究,虽然已经取得了很大进展,但仍然在许多方面存在着问题需要我们去解决。首先对中药的整体观难以把握,目前对于中药复方的研究多数以其中一种或几种成分为代表以此成分的代谢过程来表示整个复方的代谢过程。很明显中药方剂中依靠单一成分作用于单一靶点而发挥全部药效功能的情况很少见,无论复方还是单方都是个复杂的系统,多个成分相互拮抗和协同产生的综合作用。所以在研究中不应背离中医药整体观的理论基础,过分依赖西药化模式和西药植物药的研究思路。其次中药化学成分是复杂和多样的,中药处方的变异性和状态的不可预测性,给药物治疗的物质基础研究带来许多问题,上述对纯化学来源的药物可以分析的方法,还是难以全面认识中药作用的物质基础。还有众多的中药复方虽然临床疗效确切,但长期临床应用是按中医理论和经验用药的,对其作用机制的内涵以及与物质基础的关系,尤其是从药代动力学角度进行研究与国际水平还有相当差距。但是我相信随着药代动力学的不断发展,不断涌现出来的新方法和理论许多新技术如:超临界流体萃取、在体微透析、核磁共振、生物电阻抗、细胞培养研究体外吸收模型等,将会将为单味和复方中药的药代动力学研究开辟了新思路。
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药理学的研究方法篇5
【摘要】中药现代化研究是促进中医药国际化进程的重要途径，制约中药现代化研究的瓶颈之一是方剂药效物质基础研究.迄今仍然没有一个方剂、甚至没有一味中药能被阐明药效物质基础，阻碍方剂药效物质研究的关键问题在于缺乏行之有效的研究策略和方法，我们在前人研究基础上提出方剂药效物质基础研究新观点，即“药效差示血清色谱法”，在此方法的指导下研究方剂药效物质基础，希望药效差示血清色谱法的应用能进一步阐明药效物质基础，对中医药现代化及天然药物的研究有所裨益.
【关键词】方剂；药效物质基础
0引言
方剂药效物质基础研究是以药物化学与药理学为基础，分析方剂有效部位及有效成份，建立对其质量控制的方法和标准；并且为提示中药复方配伍规律、优化处方组成、改进制剂工艺、提高质控标准提供依据，为阐明中药及其复方的作用机制和代谢过程奠定基础.方剂药效物质基础研究目的是以实现开发具有自主知识产权的创新中药新药、促进中药临床疗效为新靶标，为推动中药现代化、国际化进程奠定基础.现对已取得研究进展的思路、方法及学说进行论述，并在此基础上提出研究药效物质的新思路：“药效差示血清色谱法”.
1取得一定进展的方剂药效物质基础研究思路和学说
1.1方剂整体研究罗国安［1］提出中药方剂药效物质基础的研究应采用“一个结合、两个基本讲清、三个化学层次、四个药理水平”的理论研究体系.结合现代科学方法和先进的分析仪器阐明中药作用的物质基础.具体方法是将中药方剂作为一个研究整体，采用现代分离技术，分离性质相近的化合物群(如皂甙类、黄酮类、生物碱类等)，这些化合物群即有效部分，是方剂所有药物含某类化合物的总合.刘建勋等［2］研究认为中药复方的物质基础是中医证与病相结合的有效成分，其研究思路是在中医药理论与现代医药理论的共同指导下，以临床疗效为基础，建立动物、器官和细胞模型深入研究，最终阐明中药的药效物质基础.目前对单味中药的物质基础尚不明确，故复方研究较为缓慢.
1.2方剂的拆方研究方剂拆方研究目的在于精简方剂、寻找发挥增效减毒作用的最佳药物组合及确定方剂中主要药物或活性物质来源.刘永刚等［3］对麻黄汤进行拆方研究，考察各配伍对嗜酸性粒细胞和肥大细胞的抑制作用，采用体外实验观察致敏小鼠抗原攻击后肺灌洗液（BaLF）和外周血中的嗜酸性粒细胞聚集反应，采用离体试验观察致敏大鼠抗原攻击后腹腔肥大细胞脱颗粒反应.结果显示：麻黄汤及拆方减少BaLF和外周血嗜酸性粒细胞的浸润不完全相同；麻黄汤及拆方也不同程度抑制致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒反应.说明麻黄汤对嗜酸性粒细胞和肥大细胞具有抑制作用，拆方分析显示麻黄汤全方效果最佳.给大鼠腹腔注射糖原诱导中性粒细胞聚集，分离中性粒细胞，以花生四烯酸、实电解质钙刺激离体中性粒细胞释放白三烯，再用HpLC法测定中性粒细胞中白三烯量，并以二甲苯致小鼠耳肿胀研究麻黄汤及拆方的抗炎作用.结果发现：麻黄汤及拆方不同程度抑制二甲苯致小鼠耳肿胀和中性粒细胞释放白三烯.拆方分析显示麻黄汤全方效果最佳，初步验证组方的科学性和合理性［4］.拆方可以验证方剂配伍的一定合理性及优缺点，优化组方，为寻找真正的药效物质提供相应依据.
1.3方剂有效部位药效物质研究方剂由多味中药组成，即有多种药用部位，一种有效部位中有多种药用成分，同样可以利用各种现代筛选模型和筛选技术，发现2～3种不同作用的有效部位和每种有效部位中的2～3种有效成分.以此为基础，可以进一步在有效部位和有效成分2个层次上以一种药理作用为主要因素，研究部位间或成分间或部位与成分间的相互促进或相互抑制的协同关系，初步阐明现代中药不同与西药而发挥综合治疗作用的机制［5］.黄兆胜等［6-7］用极性由小到大的4种有机溶剂依次萃取当归补血汤水煎液，所得各部位给饥饿性气虚模型小鼠灌胃，以t淋巴细胞百分数为指标，探讨发挥益气功效的有效部位；给急性失血性血虚模型小鼠灌胃，以Hb为指标，探讨发挥补血功效的有效部位.结果证明全方益气的药效物质基础主要存在正丁醇与水层的极性区间，可能主要是黄芪多糖、苷类及当归水溶性物质；补血药效物质基础主要存在于正丁醇与醋酸乙酯的极性区间，可能主要是黄芪的苷类、苷元及当归的酚性物质等.此方法揭示了一些中药的药用部位，药效物质研究尚处于探索之中.
1.4中药血清药理学及血清药物化学研究中药血清药理学主要针对中药及其复方复杂多样的化学成分特点，用含药血清代替煎剂或粗提物进行体外实验研究药效物质基础.莫红缨等［8］采用中药血清药理学研究方法，观察含双黄连及其拆方的大鼠血清对抗呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用.结果显示双黄连复方具有明显抗RSV的作用，并优与各拆方；复方及拆方的体外和血清药效学结果具有一定的相关性.可知双黄连组方合理，并具有多环节抗RSV的作用.血清药物化学主要是发现并观测血清中外源性生物活性物质以及这些物质的作用和代谢规律.王喜军等［9-10］建立了六味地黄丸及其大鼠口服(po)后在血清中的HpLC指纹色谱，分析比较六味地黄丸、缺味处方、单味生药以及各组分给药后所得血清样品，鉴定po六味地黄丸后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物.结果显示po六味地黄丸后从血中发现了11个入血成分，其中4个为新产生的代谢产物；7个成分为六味地黄丸所含成分的原型，其中有一成分虽为地黄中所含成分的原型，但其他两种药材也能代谢产生，对其体内的量变有共同的贡献，在此基础上成功分离8个化合物，并对其结构进行了鉴定，这些都将有助于阐明六味地黄丸的有效成分及作用机制.血清药理学与血清药物化学是日本学者20世纪提出的方法，对于研究药效物质有积极意义，对于我们提出新的研究方法起到抛砖引玉的作用.
1.5中药“药效团药性假说”李爱秀［11］在李石生等人的中药“分子药性假说”基础上提出“药效团药性假说”，主要论点是：①分子具有药效，其药性是有规律的.药物分子的药性蕴含在药物分子的特定结构中，“特定结构”指药物分子与某个受体产生相互作用时所具有的“药效团”；②中药所含有效成分具有分子多样性和药效团多样性特点.“分子多样性”指中药中所含化学成分的多样性，众多化学成分中作用相近或相同的分子具有相同的药效团，作用不同的分子具有不同的药效团，分子多样性是产生药效团多样性的前提；③中药药性多样性及其多靶点作用机制.中药有效成分所含药效团的多样性，决定了中药对肌体作用的多靶点作用机制.中药“药效团药性假说”的意义在于从分子水平上揭示中药药效物质基础产生疗效的作用机制.
1.6“分子中药组学”马增春等［12］提出“分子中药组学”学说，认为中药复方是通过化学成分组合影响信号分子组合，使紊乱的信号分子网络恢复平衡，从而起到治疗中医的“证”和相关疾病的作用和效果.研究路线从构建证候本质图谱“证候作用通路信号分子分子网络”出发，考察中药复方、作用部位、有效成分、成分组合等不同水平对证候本质图谱的影响.分子中药组学是从分子水平上研究中药疗效的物质基础和作用原理，使传统中药从宏观认识向微观世界接近.李鹰飞等［13］应用“分子中药组学”策略研究四物汤，结果发现:四物汤补血的物质基础是多糖、川芎嗪、阿魏酸和芍药苷，补血作用的分子机制是影响造血相关细胞因子的表达.此种方法有一定成效，但对于中医证候信号分子认识目前尚没有明确定论，而用“分子中药组学”来探讨中医机体的证候，从而确定药效物质还处于初步研究阶段.
1.7方剂组织药理学新假说及方剂代谢物组学新假说唐文富等［14-15］方剂组织药理学以期阐明病变靶组织内不同中药或方剂的主要成分谱及其浓度与靶组织病理形态学和疗效的关系；方剂代谢物组学是在运用代谢物组学理论的整体性特点和系统性思想，以中药方剂的治疗机制、作用靶点、疗效标准、药效和毒性模型的鉴别和确证、疗效和毒性的化学或生物标志物的科学.方剂组织药理学和方剂代谢物组学是以中医理论为指导，运用药理学方法研究中药(方剂)有效成分对病变靶组织的影响及其作用原理的科学.运用HpLC，LCmSmS和nmR等分析方法研究不同中药方剂在不同疾病病变组织内的成分谱、浓度变化、作用位点或受体、有效成分与组织的相互作用及量效关系，以阐明中药方剂作用的物质基础和过程，寻找中药归经理论的客观证据.上述方法对于我们提出的新方法有一定启后作用.
2方剂药效物质基础研究的新方法：“药效差示血清色谱法”
以上论述了方剂药效物质基础研究的思路、方法及学说，主要有：以方剂全方、拆方来研究有效成分或有效部位的方法；“药效团药性假说”、“分子中药组学”、血清药理学及血清药物化学、方剂组织药理学新假说及方剂代谢物组学新假说等方法.以上方法均能从有效部位、药效团等方面揭示一定的方剂药效物质，对于进一步研究中药复方和天然药物药效物质有很大的促进作用.我们在借鉴以上多种方法的优点以及对国内外大量文献追踪和检索的基础上，结合十几年中药药动学研究经验提出全新研究方法:“药效差示血清色谱法”.我们认为当中药在对证机体内产生药效变化时，机体血清中化学组分数相应的变化差中必定最小范围而最大程度的包含着真正的药效物质基础.该策略首先借助色谱法建立中药对证产生最大药效和最小药效时血清中的化学组份物质谱，然后以差示的方法表达且初步分离出该组方的体内药效物质，并将分离产物用于对证模型，以药效验证结果反馈性调整差示色谱条件，直至确认药效物质；最后结合质谱及核磁共振波谱动态定性、定量中药体内药效物质的变化，并与相应的药效结合研究，进一步确认中药的药效物质基础.此方法是借助血瘀证模型基础上，以红花为工具药，以缓解心肌缺血、改善冠脉血流等指标为药效，以红花在对证机体产生最大和最小药效时血清中物质谱的变化差为导向，以色谱、波谱等方法追踪分离和鉴定红花的药效物质.提出“药效差示血清色谱法”的意义在于以红花研究为基础，以实现中药现代化为目标，利用现代药理、药化、分析等多种新知识、新理论，从研究机体血清化学组分数相应变化差中，寻找药效物质基础，从而为真正揭示方剂药效物质基础研究开创了一个全新局面，为研究创新中药、中药国际化进程奠定基础.
3展望
方剂药效物质基础研究一项非常复杂且庞大的工程，涉及中药、药理学、数学、分子生物学等多学科的交叉和融合.相信只要中医药科研工作者齐心协力、相互配合，将中药药效物质基础研究与中医理论研究相结以实现中药现代化为目标，应用“药效差示血清色谱法”的方法，利用现代药理、药化、分析等多种新知识、新理论，从研究机体血清化学组分数相应变化差中，寻找药效物质基础，从而为真正揭示中药和天然药物药效物质基础研究开创了一个全新局面，能够开发出一批能控制或治愈当今世界上重大疑难病证的新药，让中药真正走向世界，为全人类的健康作出贡献.
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药理学的研究方法篇6
关键词：中药；药代动力学；中医药现代化
1中药药代动力学研究意义
中药及其复方的药物动力学研究，是近十多年兴起的中药药理学分支，主要是研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄，用数学模型来定量描述药物在体内的动态过程。它对中药药理学及中医临床医学的发展有着重要的意义。中药药动力学研究是阐明中药作用机理必不可少的环节。药代动力学参数可以为毒性试验设计和毒理效应分析提供依据。受多种因素的影响，毒性试验观察到的毒性反映往往不与剂量相关而与血药浓度相关，如果高浓度的药物剂型不利于药物吸收，进入体内的药量与剂量不成正比，就有可能造成毒性剂量评估上的偏差。众所周知，进行中药及其复方制剂的药代动力学研究会有不小的困难，因此，更需要广大的医药学工作者集中力量，找出中药作用中有代表性，有规律性的机理或具有可行性、可操作性的系统研究方法学，使中药药代动力学的研究更科学、更系统，更能满足现代临床治疗的要求。
2中药复方的自身特点及中医对药代动力学的认识
中药复方是中医防治疾病的主要手段。中医理论的特色之一就在于强调“人”的整体观，发挥药物的整体调节作用，并用辩证施治的思维方法来处方用药。现代药理学研究已初步证明复方药效的发挥并非是简单的单味药相加或毒性的相减，而是方中药物之间所发生的协同、制药或改性等作用，使复方达到预期的治疗目的。目前，国内对复方的研究中，有相当一部分在药理效应及临床疗效的观察阶段，虽然也引用了一些西药药理学手段，但仅表现在对几个特异性指标的观测上，且重复研究居多，所研究的中药复方组成不稳定，药效重现性差，难以全面而准确地反映出复方药物的作用机制，这使得国内复方制剂稳定性差，质量标准不高，较难与国际医药市场接轨。中药成分十分复杂，即使是单味药物，其所含的有效成分也达数种之多；而且在多数情况下又是以复方制剂给药。许多中药到目前为止其有效成分和作用机制还不是很清楚，加之中药中的一些有效成分含量很少，并且还有不少结构相似的类似物。来源产地不同，不同季节采收，不同方式加工等特点，使得常规的化学分析以及数据的解析产生困难，实验结果不易重复，给药代动力学的研究带来了许多困难。
3中药药代动力学研究的现状
中药的药物代谢动力学的研究与西药相比有很多不同的地方，因此决定了其研究方法也存在一定的差异。一般按有效成分明确的中药及其制剂的药物代谢动力学研究和有效成分不明的中药及其制剂的药物代谢动力学研究两种情况来进行评述。
3.1有效成分明确的中药及其制剂的药代动力学现状
有效成分明确的中药及其制剂的药代动力学研究方法与西药类似。随着对中药中有效成分的研究方法和检测技术的改进和完善，目前许多中药特别是单味中草药的有效成分已相当明确，据统计在九十年代前就已对120多种中药的有效成分进行过研究[1]。并已对相当一部分进行了体内外代谢的研究，且得出了明确的代谢产物，并对其体外药代动力学参数进行了研究。如毕惠嫦[2]研究了丹参酮Ⅱ_a在大鼠肝微粒体酶中的代谢动力学，指出了参与丹参酮Ⅱ_a体内代谢的肝微粒体酶。艾路等[3]对复方中药中乌头生物碱在人体内的代谢产物进行了研究，采用液相色谱-电喷雾离子阱多级质谱(LC-eSi-mSn)法检测出5种乌头生物碱代谢产物。陈勇[4]等对葫芦巴碱在大鼠体内的代谢产物进行了推测，从大鼠尿中检测出原药及其三种代谢产物。3.2中药复方及其制剂的药代动力学研究现状
到目前为止还有许多中药及其复方制剂或因化学结构不明，或由于是混合物而非单体，无法用化学分析方法测定有效成分含量，因而给其药物代谢动力学的研究带来困难。大部分人用复方或其制剂中的某一单体来代替整方的药物代谢过程。如李再新[5]等将补阳还五汤水提醇沉液给予家兔静脉注射后，以川芎嗪为指标来测定其在体内的代谢过程；但此法只能说明此单体在体内的过程而不能说明全部成分的代谢过程。中药制剂化学成分往往十分复杂，相当于一个天然的化学成分组合库，用其中的一具或数个化学成分作为检测指标，得出的药动参数与药的实际药动学相比可能有一定的偏差。也有人采用生物效应法进行药物代谢动力学的研究，但此法不够精确，只能粗略看出体内药物浓度变化的过程。生物效应法认为，在一定条件下，体内药量与药物的效应有一定对应关系，从药效的变化可以推知不同时间内体内药量变化。常用的生物效应法有以下几类：
(1)Smolen。此法是目前我国医药研究者最为广泛采用的一种进行中药单味药及复方药药动学研究的方法。其要义是将量效关系曲线作为用药后各时间作用强度与药物浓度的换算曲线，从而推算出药动学参数。卢贺起[6]等以血小板聚集抑制率为药理效应指标，对家兔进行了四物汤的药动学研究，结果表明四物汤属静脉外给药一级动力学消除，开放的一室模型，并计算出药动学参数。
(2)药物累积法。其基本原理是将药物代谢动力学中的血药浓度多点测定原理与用动物急性死亡率测定药物蓄积性的方法结合起来；是用多组动物按不同时间间隔给药，求出不同时间体内药物的存留百分率的动态变化，据此计算药物的表观半衰期；又称为毒理效应法。黄衍民[7]等对乌头注射液对小鼠的毒效动力学研究，得出药物的消除级动力学过程，并符合一室模型，其表观半衰期为59.23min。从而指出目前临床一日2次给药间隔时间太长，如果每8小时给药1次且首次倍量，可能会进一步提高疗效降低毒副作用。陈长勋[8]等应用LD50补量法测定小鼠的附子表观参数，结果认为符合二室开放模型并得出了主要的药动学参数。利用此种方法进行药代动力学研究的中药还有陆英煎剂[9]、小活络丸[10]、九分散[11]、桑菊饮[12]等。但此法实际上反映的是药物的毒性效应动力学过程，当毒性成分与药效成分不一时，所得动力学参数将难以用作临床用药指导，在致死剂量作用下，机体已受到损害，可能对药物在体内的动力学过程产生较大影响，使得所得结果不能表征生理药动学过程。
(3)药理效应法。该法以给药后药效强度的变化为依据，通过适当剂量的时间-效应曲线，进行药效动力学参数计算，其消除半衰期称为药效半衰期或药效清除半衰期。本法先选择适当的药理效应作为观测指标，得出剂量-效应曲线、时间-效应曲线和时间-体存药量曲线，并据此得出药代参数。富杭育[13]等按足趾汗腺分泌的观察方法，应用本法观测大鼠麻黄汤的药代动力学。通过量效、时效和曲线的转换，得体存量-时间曲线，从曲线分析属二室模型。另外赵智强[14]等也报道了天麻钩藤饮用此法所得药动学参数。此法要求复方及其制剂药效强且可逆重现、反应灵敏、可定量检测，因而限制了其应用。
(4)微生物法。此法仅适用于具抗病原微生物作用的复方，通常用琼脂扩散法测得相关药动学参数。它具有方法简便、操作容易、样品用量少等优点，但机体内外抗菌效应作用机制的差异，细菌选择的得当与否，可在一定程度上影响药代参数的准确性。王西发[15]等用此法测定了鹿蹄草素在兔体内的药动学参数，其选取用的是金黄色葡萄球菌为实验菌株，研究表明鹿蹄草素属于二室分布模型。4小结及展望
近年来国内外学者在中药药动学研究方面进行了大量的实践，内容涉及中药生物利用度[16]、中药毒代动力学[17]、中药透皮吸收药动学[18]、中药时辰药动学[19]、中药证治药动学[20]、中药活性成分在肠道的代谢处置[21]、中药活性成分的体液浓度测定等。但因为中药成分的复杂性、有效成分的不确定性、类似物的多样性，导致实验结果不易重复。加之中药配伍和中西药结合后药物的互相影响等使得中药药代动力学发展较为困难。今后尚需加强以下几个方面：4.1建立中药的指纹图谱库
建立中药指纹图谱库，并在此基础上，探讨药物吸收入血后相应指纹图谱峰的变化，以此为目标，进行药代研究。
4.2将中药的药代研究与中医理论研究相结合
中药研究是在中医理论指导下对药物进行的研究。可采用“证治药动学”的方法进行，即研究中药在不同证候时的药动学是否具有不同特征。再者还应开展中药配伍后及与西药同用时的药动学变化研究。
4.3加强代谢物动力学研究
许多中药药效成分是在体内产生的，或是代谢而来，或是在肠道菌群激活下产生的，因此中药代谢物动力学研究具有重要的意义。应进行中药复方代谢物的种类代谢途径及代谢场所的研究，以阐明代谢物与方剂药效的关系及代谢物的动力学规律。
4.4加强新技术的应用
现代新技术将在中药药代研究中发挥重大作用。许多新技术如：超临界流体萃取、在体微透析、核磁共振、生物电阻抗、细胞培养研究体外吸收模型等，将会为中药药代动力学的研究提供新的技术平台。
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药理学的研究方法篇7
摘要：回顾了近年来中药复方药代动力学的常用研究方法，包括生物效应法和血药浓度法，以及国内外学者提出的比较有代表性的各种假设或设想，如“证治药动学”新假说，“复方效应成分动力学”假说，“辨证药动学”假说，“中药胃肠药动学”和“血清药理学”等，客观评价其在研究中药复方药代动力学中的特点。
关键词：中药复方；药代动力学；研究方法
中图分类号：R969.1 文献标识码：a文章编号：1673-7717(2007)05-1041-03
研究中药复方的药代动力学规律，可以阐明和完善中药复方原理及其作用机制；获取中药复方药动学参数，为提高中药复方制剂质量和优化给药方案提供科学依据，同时也为在研究中发现新活性代谢产物而创新中药新药莫定科学基础。由于中药复方由多味药组成，每味药又含有多种有效成分，其成分复杂，干扰因素多，因此，药动学研究比起西药有较大的难度。采用何种方法学来研究中药复方药代动力学，才能更准确、更完整、更科学地揭示中药复方的药动学特征，仍在不断探索中。就目前主要用于中药复方药代动力学研究的生物效应法和血药浓度法总结如下。
1生物效应法
从中药的生物效应看，有效成分和毒性成分是中药复方成分的主要部分，可针对性地分别进行实验，推算其药动学参数。80年代初期产生了以药效为指标进行药代动力学研究的理论方法，该实验方法发展到今天主要有药理效应法，药物累积法和微生物指标法。
1.1药理效应法1975年，Smoden就提出以药效为指标测定药动学参数的方法，其基本思想是假定药效在体内呈线性关系。药物在作用部位的药量(Q1)与给药量D呈正比，而(Q1)又与药物效应强度(et)有对应的函数关系即，Q1=f(e1)。给药后某一时刻作用部位药物浓度与药效强度的函数关系，可用给药量D与药效强度(e2)的函数关系来表示，即D=f(e1)。由此进行模型分析和推算药动学参数，主要用于有效成分不完全清楚及成分复杂难以检测的中药复方药动学研究。
效量半衰期法也是研究药理效应的方法之一。该法是80年代中期，山东省中医药研究所李成韶等人在对青蒿素抗疟作用的研究中所提出的。效量半衰期t1/2(eD)是指体内有效药量减少一半的时间。效量半衰期法先通过实验测得药物的量―效曲线和时―效曲线，然后利用两曲线的截距和斜率求算KeD(体内有效药量消除速率常数)和t1/2(eD)(有效量半衰期)，从而指导临床合理用药。
药理效应法是研究中药复方药动学的常用方法，它能体现中医药的整体性，符合中医药基础理论。由于中药及其方剂的药效作用是多方面的，某种作用的药动学过程并不能代表该药的全方位作用特点，须用多个药动学指标来反应中药复方的作用规律。如分别以发汗，解热，抗炎和肠蠕动为指标研究了麻黄汤等4个解表作用的药动学规律，发现用不同指标测定的药动学参数相差较大。因此，选择药效指标应是该药的主要作用，而且与临床用药目的相一致。对于可反复检测且重现性好的指标，可于用药后的不同时间检测其变化；对于变化迟缓，不能迅速恢复，甚至不可逆的药效指标，可将动物分为若干时间组，分别于造模前和不同时间给药，再按均内一致的原则造模，以模型指标变化的达峰时间检测不同时间组药效强度的变化。
1.2药物累积法 药物累积法又称毒理效应法，是一种利用动物急性累积死亡率来求算药物动力学参数的方法。其原理是将血药浓度多点动态测定与急性死亡率测定蓄积性的方法结合，以估测药物体存率和表观半衰期来研究中药药物动力学的方法。该法具有非特异性，只要能使动物急性致死的药物，不论药物的性质如何，都可求算其药物动力学参数。因此，该法对于有效成分不明确或成分复杂或无合适化学定量方法的中药来说，是一种很好的药物动力学研究方法，主要适用于具有一定毒性的中药及中药复方的药动学研究。
药物累积法以动物急性死亡率为指标，明确可测，体现了中药制剂复方配伍的整体性，符合中医基本理论，其参数能比较真实地表明制剂的体内动态变化规律。但累积法是以动物死亡率为指标，不一定与药效平行，试验所需的动物较多，剂量也大于临床实际用量。第1次给药后可引起组织器官损伤，第2次给药时，体内药物可能已经消除，但机体的损伤还未恢复正常，结果动物对药物的耐受性降低，可能导致动力学参数改变，用此法求得的药动学参数不一定与通常情况下药物实际动力学过程相符。
1.3微生物指标法又称琼脂扩散法。是对具有抗菌活性的药物，利用微生物法测定生物样品的浓度，然后拟和模型计算药动学参数。微生物指标方法简单，指标明确，操作容易，重复性高，有较高的灵敏度，为成分复杂有抗菌作用的中药药动学研究提供了一个新的思路。如王西发等采用微生物法测定了家兔体内鹿蹄草素药动学参数。但中药复方干扰因素多，同时血清有效成分很难达到抑菌浓度，因此微生物指标法在中药复方药动学研究中应用还不多。
2血药浓度法
既通过测定中药复方已知成分在体液中的浓度计算各种药动学参数，以此为代表研究中药复方药动学。自80年代以来，有关中药及其制剂药物动力学的研究报道。多以血(尿)药浓度测定法代替由放射性同位素示踪法测定中药有效成分在动物体内吸收、分布、代谢、排泄过程的研究手段。其中目前公认较好的体内药物浓度测定方法有分光光度法，气相色谱法，高效液相色谱法和免疫法，多采用联用技术以弥补单一技术的缺点。该类方法简便，快速，灵敏度高，专一性强，重现性好，回收率高。
紫外分光光度法在血药浓度检测中应用广泛，测定方法简单，快速。存在的主要问题是特异性不高，常受到血浆中内源性物质和药物代谢产物的干扰。如测定板蓝根注射液在家兔体内药物动力学参数中，板蓝根的主要成分为靛蓝和靛玉红，其中靛玉红的吸收峰在(540±1)nm处，与血红素(572±1)nm的吸收峰相距太近，有干扰，不宜作为检测指标，因而选择特异性高的靛蓝作为检测指标。
气相色谱法已作为一种高速发展的技术应用于体内药物分析，是测定血清中有效成分的一种常用方法。近年来随联用技术的不断发展，气液色谱(GLC)、气相色谱一质谱联用(GC-mS)等技术扩大了该法的应用范围，提高了灵敏度(1-0.001μg)、专一性。尤其是GC-mS联用技术，发挥了色谱分离与质谱定性定量的各自优点，成为研究药物代谢产物的重要工具。例如杨丽莉等建立了气相色
谱一质谱联用检测法同时测定血浆中冰片和川芎嗪血药浓度的方法，冰片和川芎嗪的血中回收率分别为97.32％和87.37％；最低检测浓度为2ng/mL。
高效液相色谱法不受药物的热不稳定性和挥发性所限制，具有样品适用范围广，预处理简单等优点，为快速、灵敏、专一的体内药物分析方法。例如，葛根素滴眼液眼内药物动力学的实验研究表明，采用高效液相色谱紫外检测法测定房水中的葛根素含量，具有灵敏度高、特异性高、精密度高、步骤简便等优点。
免疫法是70年展起来的检测技术，用于体内药物的分析有独特之处，取样量小，专一性强，灵敏度也高，常用有放射免疫法(Ria)和酶免疫法(eia)。其检测限达0.001ng。放射免疫分析法是一种放射性同位素技术与免疫化学技术相结合的体外测定超微量(10-10～10-9)物质的新技术，如刘曙光等对黄夹次苷甲和苷乙的放射免疫测定及其药代动力学研究。酶免疫分析法是抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用机制有机结合的一种新的免疫学测定方法，测定仪器简单，测定速度快，易于自动化或半自动化测定，因此可应用于中药药动学的研究。
中药复方药动学研究经过20余年的发展，中外学者一直在研究方法上进行探索，试图找到一种能更准确、更完整、更科学地揭示中药复方药动学特征的研究方法。陆续提出各种假设或设想，比较有代表性的有“证治药动学”新假说，“复方效应成分动力学”假说，“辨证药动学”假说，“中药胃肠药动学”和“血清药理学”等。
“证治药动学”新假说，即中药配伍对方剂药动学的影响和方剂药动学与“病证”的关系。它包括复方效应成分动力学和辨证药动学。
“复方效应成分动力学”新假说，是指复方中药的君臣佐使(药物合用)可明显影响彼此在体内(血清)化学成分的药动学参数，并与疗效和毒副作用密切相关。因为所定性定量的化学成分与母方的治疗效应和毒性效应相关，所以称为“复方效应成分”。
“辨证药动学”假说，其目的就是探讨中医“证”的生理病理状态对药物动力学的作用规律。对同一药物的不同证的药动学参数经统计学处理，参数的差别明显影响药物疗效和毒副作用。
“中药胃肠药动学”，主要是研究中药复方制剂在胃肠内的动态变化过程，虽然这种变化是机体对药物的最初始作用，但它将影响到复方中各种成分在体内的全过程。
药理学的研究方法篇8
论文摘要:本文集止痛中药传统理论研究、现代实验研究、临床应用研究等药性相关文献于一体,是对历代止痛中药文献进行的一次大集结。文章采用拉网式搜索、穷竭式收集、主题式筛选的方式,在占有大量文献基础上,进行中药止痛机制的传统理论文献研究,分析各种因素的相关性,完善止痛中药的理论体系。
止痛中药的应用历史悠久,临床应用十分广泛。它不仅能减轻和消除患者的痛苦,而且能在一定程度上消除疼痛病因,标本兼治,提高病愈率,特别对某些重度顽固性疼痛疗效卓着,体现出中医药的特色与优势,因而受到历代医学家的重视。笔者经过广泛调查古今对止痛中药的研究概况,现归纳如下:
1.关于止痛中药的传统理论研究
止痛中药传统理论的原始记载,多见于历代诸家本草,如《神农本草经》《本草经集注》《名医别录》《吴普本草》《证类本草》《本草纲目》等。《中华本草》对历代本草进行了一次大集结,其中关于止痛中药的记载,散见于各类中药的文献中。这是迄今为止对止痛中药的传统理论最具权威性的总结。只因不是专门性的止痛中药文献专集,卷帙浩大,翻检不便,对止痛中药的研究缺乏针对性的指导意义。《止痛本草》是一本集古今运用中药止痛药物理论、临床和实验研究的专着,广泛搜集中药各种止痛药,分类进行各项研究,集中古今医家用药的理论、经验及现代药理研究,这不但可作为各种痛证辨证用药与专方专药的运用依据。而且对寻找研制各种止痛药也可提供丰富的参考资料。
2.关于止痛中药的现代实验研究
关于止痛中药的现代实验研究,主要有两个方面:
2.1止痛中药有效成分的实验研究
随着中西医学的相互渗透,止痛中药的现代实验研究取得了很大进展。对近二十年的中医、西医、中西医结合的重要杂志及《中华本草》《现代中药药理学》等文献进行普查,发现已有300余种中药被实验证实有镇痛作用。其中一部分药物是经古代本草文献明确记载有“止痛”功能者,如延胡索、吴茱萸、五灵脂、没药等。也有一部分是古代本草并未记载有“止痛”功能者,如灵芝、党参、海参、土茯苓、天竺黄等,是在实验研究中被发现有止痛作用。这说明止痛中药的筛选十分必要。对止痛中药有效成分的实验研究有多方面的,如:①生物碱类镇痛活性成分的研究,延胡索乙素是生物碱的典型代表。吕富华在“延胡索的止痛作用的比较”一文中总结:“实验表明,延胡索总生物碱的镇痛效价为吗啡的40%,且镇痛作用乙素>丑素>甲素。”皂苷类镇痛活性成分,李小川在“怀牛膝总皂苷镇痛作用研究”一文中总结:“对怀牛膝总皂苷采用化学刺激、热刺激进行大、中、小3个剂量的镇痛实验观察,结果显示有明显的镇痛效果,且作用与剂量呈现一定的量效关系。”另据研究证实,人参皂苷、白芍总皂苷、柴胡皂苷等均有明显的镇痛作用。⑧酚、酮、醛类镇痛活性成分,原田正敏“桂皮药理学研究”文中说:“桂枝醛对醋酸所致小鼠扭体反应有显着抑制作用”;末川在“生姜た关さざ药理学研究”文中说:“丹皮酚可使醋酸引起的小鼠扭体反应次数减少,抑制率50%。”
2.2止痛中药镇痛机制的研究
现代医学对止痛中药的镇痛机制做了大量研究,不仅找出了止痛中药的许多有效镇痛成分,而且也阐明了止痛中药的一些镇痛机制。吴承艳在“止痛中药的研究与思考”口文中,对止痛中药镇痛机制的研究进行了总结。归纳为6个方面:①中枢镇痛;②麻醉镇痛;③抗感染镇痛;④解热镇痛;⑤解痉镇痛;⑥抗凝镇痛。
3.关于止痛中药临床应用的研究
止痛中药临床应用的研究,以专着居多,如唐迎雪主编的《止痛中药临床应用》,收录止痛中药88味。对每一味药物的性味、归经、功能应用、用法用量、使用宜忌等进行了简明扼要的表述,非常实用。张卓主编的《疼痛中药特效秘方大全》,董连荣主编的《古今止痛验方大全》螂则以止痛方剂为重点。在论文方面有:肖金撰写的“止痛方药的临床应用”,将止痛方剂分为:清热止痛方、祛瘀止痛方、温经止痛方、祛风除湿止痛方,亦是以方为主、以方带药的论述。王顺成撰文“痛症的病因病机与止痛中药的临床应用”,首先分析痛症的病因病机,然后将止痛中草药分为:解表止痛药、祛风湿止痛药、活血化瘀止痛药、行气止痛药、温里止痛药、麻醉止痛药、清热止痛药7大类。每类举出4~5味代表药物,论述其止痛功能与适应证吲。以上研究是以实用举要为主,缺乏全面、系统、深入的文献研究。
还有一些关于古今名医治痛经验的评述:如赵天才等撰文“张仲景治痛十四法”,总结了张仲景治痛症的内治法与外治法。内治法包括:解表治痛法、散寒除湿治痛法、和解治痛法、表里双解治痛法、呕吐治痛法、攻下治痛法、温补治痛法、行气治痛法等。外治法包括了搐鼻治痛法、针刺治痛法等。该文对止痛的治疗法则及给药途径进行了发掘㈣。韩学杰等撰写“沈绍功教授痛症辨证论治经验”一文,对沈氏从医四十余年的经验进行总结。提出辨证分为虚实、部位划分7类、病性分为寒热等思路与经验。
4.关于毒剧止痛中药的研究
止痛中药虽然毒性较大,但生物活性亦强,止痛效果好。若临床应用恰当,确能起沉疴顽疾。若用之失宜,则祸不旋踵。为了充分发挥毒剧止痛中药的独特疗效,防止毒副作用。很多医者对毒剧止痛中药的合理应用投入了大量精力进行研究。如唐迎雪的论文“毒剧止痛中药的合理应用体会”,总结出临床应用的几条原则,如:①宜于顽痛;②作用为主;③炮制得法;④合理配伍;⑤控制剂量;⑥选择剂型;⑦煎服相宜。该文对临床应用毒剧药物止痛具有针对性很强的指导作用。朱建伟撰写“马钱子碱镇痛作用及其药效动力学研究”一文,认为马钱子碱具有肯定的镇痛作用,药效强度较高,维持时间较长。
5.对止痛中药研究的动态综述
吴承艳撰文“止痛中药的研究与思考”中,将该领域里的研究总结为4个方面:①古代文献对止痛中药的收录研究。②古代医家对止痛中药用药特点研究。③止痛中药有效成分的研究。④止痛中药镇痛机制的研究。吴氏在“对止痛中药研究的思考”这部分内容里,首先提出了“必须加强中医药文献的系统研究。”她说:“在大量的方剂文献中能寻找出有效的止痛中药。本草文献更是直接记载前人使用中药、研究中药的重要信息之源。因此进行中医方药文献的系统研究,对加快止痛中药的研究与开发起一定的重要作用”。吴氏之说确为真知灼见。
6.对止痛中药药性理论的文献研究
药理学的研究方法篇9
淳安县中医院病区药房，浙江杭州311700
[摘要]本文就单味中药和复方中药在指标性成分、有效成分、药效学、药动学等方面进行分析与探讨，可尝试将将一些新型技术运用到中药药动学的研究中使中药药动学向更深、更广的层面拓展，为中药药动学及中药药效物质基础的深入研究提供参考。
[
关键词]中药药物；代谢；动力学
[中图分类号]R969 [文献标识码]a [文章编号]1672-5654（2014）10（a）-0194-03
[作者简介]向旭（1982-），女，汉族，浙江淳安，本科，中药师，主要从事药房调剂工作。
药物动力学的研究成果已在开发研制新药，筛选疗效更高,毒副作用更低的药物,调整用药方案等方面发挥着重要作用。中药药物代谢动力学是研究单味或复方中药在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，对阐明中药复方的组方原理和作用机理，促进临床合理用药等具有重要意义[1]，也为中西药配伍使用提供了良好的依据。本文就近几年的中药药动学研究进展进行简单的述评。
1中药药动学的研究阶段
中药药动学的研究过程大体可以分成以下三个阶段[2]。
第一阶段，为建国至上世纪70年代，主要为中药活性成分的体内研究。
第二阶段，自20世纪80年代初至80年代末，其间中药药物动力学有了迅速的发展。主要表现在：房室模型拟合已广泛应用于药-时数据的解析和参数计算；高度灵敏、特异的微量分析技术的应用，从而使体液药物浓度的测定水平大大提高；研究方法的创新—主要是毒理效应法与药理效应法在研究中药药物动力学中的运用。
第三阶段，自1990年至现在，中药药物动力学研究出现生机勃勃的大好局面，中药药物动力学已初具规模，主要表现在：中药复方制剂的广泛研究；新的理论、学说以及新观点的出现推动中药药动学向更高水平迈进；药动学-药效学结合模型的提出使中药药动学研究水平向更大的广度和深度发展。
2中药药动学的研究方法
中药药动学的研究方法可以分为血药浓度法和生物效应法[3-4]，LiY[5]用高效液相色谱测定复方制剂川芎酸枣仁汤在大鼠体内的血浆浓度，结果表明该方法能成功应用于大鼠口服川芎酸枣仁汤后的药动学研究。其中的生物效应法又包括了药理效应法、药物积累法及微生物指标法等三种。针对血药浓度法和生物效应法两者相比较而言，前者有着较完整的理论体系，可精确化各个参数是其显著的优势。中药复方成分复杂,有效成分难以确定,采用生物效应法研究.虽然有不足之处,但是更能体现中医的整体观.因此，仍有必要对这两类方法进行深入的探讨。
3单味中药的药动学研究
3.1单味中药指标性成分的研究
随着科技的发展，新技术的应用，极大地推动了中药药动力学的发展。分光光度法、色谱法、高效毛细管电泳、免疫法、微生物法以及联用技术等都普遍运用于单味中药的研究中炎彬等[6]用荧光分光光度法、反相高效液相法分别测定了给药后不同时间点葛根黄酮及其葛根素在正常和脑缺血再灌注大鼠体内的血药浓度。结果表明，葛根黄酮及葛根素动力学均呈一室开放模型。正常和脑缺血再灌注状态下，葛根黄酮的t1/2分别为(34.3±11.8)和(43.7±24.1)min；葛根素的t1/2分别为(11.6±1.2)和(15.8±2.1)min。SunS等[7]采用高效液相色谱法测定川芎中阿魏酸在人体的血药浓度，以oDS为固定相，甲醇-水-冰醋酸(40:59.7:0.3)为流动相，患者的血清样本用水沸法进行预处理，再测定阿魏酸在人体的血药浓度。结果表明该方法准确，可靠，能为临床用药提供依据。
3.2同一种有效成分的不同研究方法
随着新技术的运用，同一种药物可以用不同的方法研究其在体内的药动学，如川芎嗪（Ligustrazine,tetramethylpyrazine，tmp）、没食子酸丙酯（pG）都是被多种方法进行体内研究的物质。杜贵友等[8]用HpLC法、[3H]标记法及紫外分光光度法三种不同的方法分别测定小鼠血中pG，计算出的药物代谢动力学参数有明显差异，紫外分光光度法较[3H]标记法所测的pG分布及消除相半衰期要短得多；紫外分光光度法测定pG在275nm处有一最大吸收峰，与HpLC在270nm的最大吸收峰接近，但所测分布及消除相半衰期较HpLC法的要长的多，其原因很可能是pG代谢产物的量的不同和动物种属的差异；用HpLC只测定pG原型在血中消除的速度，排除了代谢产物的干扰，因此，用不同方法所测pG的药物代谢动力学参数有明显的差异。
4复方中药的研究
4.1中药复方中某一有效成分的研究
中药及其复方制剂成分复杂，只有少量成分能进入生物体内，但是可以通过对相关药物成分进行药动研究，进而了解药物在体内的代谢过程。例如，宋金春等[9]研究中药复方生化汤的药动学是以阿魏酸为指标性成分的，其先用沸水浴法去除血浆蛋白质后用Rp-HpLC直接测定阿魏酸(Fa)的方法，求算出生化汤来源Fa的药动学参数。郑春英等[10]以绿原酸为指标性成分研究中药复方泌炎康胶囊在家兔体内的动态变化，研究表明泌炎康胶囊中绿原酸在家兔体内的吸收为一室模型一级吸收。
4.2复方配伍的药动学研究
中药复方是在传统中医药理论指导下，采用“君臣佐使”的组方原则和根据药物的“七情和合”的配伍理论，临床辨证论治，组合而成。同一种药物在不同的处方中，所起的治疗作用并不相同。所以同一味中药成分的药动学参数会受很多因素影响，这是中药与西药最明显的不同之处。其可能表现为某种成分的吸收速率、吸收程度以及消除速率等等药动学参数的改变。阴健等人[11]开展了黄芩苷以及其在针剂清开灵注射液中的药代动力学研究，实验显示黄芩苷40mg/kg静脉给药后，在兔体内符合三室开放模型，给予清开灵注射液后，黄芩苷的血药浓度经计算机自动拟合符合二室模型。单一的使用黄芩苷和其在中药复方中使用，所发生的房室模型的转变，被认为是因为清开灵注射液中的栀子、胆酸等成分影响了黄芩苷的体内过程，但在两种不同条件下的统计矩参数无明显变化。吴立军等[12]证实给大鼠灌服参附汤后，乌头碱类生物碱卡米查林(carmichaeline)、塔拉胺(talatisamine)、附子灵(fuziline)以原型形式被吸收，人参皂苷经肠内细菌代谢后以代谢物compoumdK形式吸收进入体内。
4.3中西药配伍对药动学及药效学的影响
随着医药行业的不断发展及临床用药的日趋多样化，中药配伍西药的用法在临床上越来越普遍。王剑虹等[13]总结了中药与西药配伍使用对药动学的影响。药动学的相互作用包括三个方面：
①吸收方面主要为影响药物的透膜吸收和影响药物胃肠稳定性。影响药物透膜吸收的是中药中的某些成分如鞣质、药用炭、生物碱、果胶及金属离子等，它们易与西药特别是固体形式口服的西药结合或吸附，可导致某些药物作用下降。中药中含有某些重金属或金属离子，当与一些具有还原性的西药配伍使用时，会生成不溶性络合物或螯合物，影响药物胃肠稳定性甚至造成毒副反应或生物效应的降低。②分布方面主要是影响药物与血浆蛋白结合、组织结合。如绣球菊属植物的和黑柳，可取代与血浆蛋白高结合率的西药如华法林与血浆蛋白结合，从而降低华法林的血浆蛋白结合率，影响药物疗效。中西药配伍使用后，药物的血药浓度有所变化，从而也会影响药物组织结合。银杏叶与地高辛合用促进主动脉内皮细胞内Ca2+水平，使地高辛的游离血药浓度明显上升，易造成中毒，因此，临床上两者联合使用时应适度降低地高辛剂量，并进行血药浓度的监测。③中西药配伍时会影响药酶的活性，从而影响药物在体内代谢，主要为酶促反应和酶抑反应。④排泄方面主要是增加和减少排泄作用。徐庆等[14]采用Rp-HpLC法，检测黄芩和黄芪与左氧氟沙星(LVFX)配伍给予志愿者后在尿中的排泄量，计算药动学参数。研究结果表明，黄芪与LVFX共同服用其药动学参数的各项指标与单服LVFX相比无显著差异(p>0.05)。表明黄芪对LVFX在尿中排泄无影响，没有改变LVFX经肾脏的排出速率，可配伍使用。而黄芩与LVFX共同服用时，其尿药排出总量(Xu)和排泄分数(p%)与单用LVFX相比，有非常显著性差异，LVFX累积尿排出量由(177.62±11.31)mg下降至(149.4±18.65)mg(p<0.01)，排泄分数由(88.81±5.66)%下降至(74.7±9.32)%(p<0.01)。表明黄芩对LVFX在尿中排泄有一定的影响。
国外对中药药动学也有一定的研究，如tsaip[15]用高效液相色谱法测定黄连在大鼠血、肝、胆中的浓度，结果表明黄连可能在肝脏代谢,经肝胆排泄。
无论是单味中药还是复方中药，所含成分均较复杂，其在生物体内疗效的发挥均是多种成分共同作用的结果，目前对中药药物动力学的研究只是很肤浅、很局限的一部分，今后可以考虑尝试将一些新型技术如指纹图谱等运用到中药药动学的研究中.使中药药动学向更深、更广的层面拓展。
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药理学的研究方法篇10
湖南中医药大学医史文献教研室，湖南长沙410208
【摘要】湘西民族医药不仅是自然科学遗产，也具有鲜明的文化性。人类学方法在研究民族医药文化中具有较高的价值。本文总结了人类学的特点及其在民族文化研究中的作用，研究民族医药文化常用的人类学方法，以及人类学方法研究湘西民族医药文化取得的成果，探讨湘西民族医药文化的人类学研究可拓展的方向。
关键词民族医药；湘西；人类学
【中图分类号】R29【文献标志码】a【文章编号】1007-8517(2015)05-0034-02
湖南地区的少数民族以土家族、苗族、侗族、瑶族、白族等为主，根据2000年第五次全国人口普查数据，湖南少数民族人口占全省总人口的10.13%。其聚居区主要在湘西土家族苗族自治州，以及怀化市、张家界市、邵阳市等所辖县乡地区。湘西各个少数民族都有自己独特的医药文化，虽然没有文字，但在几千年的流传过程中口耳相传，延续至今。其中土家族、苗族、侗族、白族医药文化近三十年来研究者较多，取得了丰硕的成果。民族医药属于古代留存下来的珍贵文化遗产，但是由于民族医从业人员较少，游离于规范化医疗体系之外，后继乏人，没有得到大力的扶持，因而湘西民族医药面临着传承的危机与困境。我们认为，湘西民族医药应该从文化研究、政策扶持、资源保护、制度建设等多个角度入手，制定战略性的可持续发展计划，全方位地挖掘、保护，才能使民族医药这种珍贵的文化遗产不至于在医药现代化的今天销声匿迹。在文化保护方面，利用人类学的方法和理论加强对湘西民族医药的研究是最合适也最行之有效的研究手段。
1人类学方法研究民族医药的优势和特色
人类学是从生物和文化角度对人类进行全面研究的学科群，是研究人的起源与发展，包括人的体质与文化变迁的学问。它在西方兴起之初曾大量研究世界各地的所谓原始文化或野蛮人文化。上个世纪八十年代，中国人类学学会成立，人类学开始复兴。期间我国人类学者进行了大量少数民族文化研究。
1.1人类学的特点及其在民族文化研究中的作用从文化研究的角度来说，人类学这门学科通过研究人类的生活方式，研究全球不同的文化，揭示文化的多样性，它具有自己独特的学科特点。人类学的基本理念是文化相对论、文化整体观和文化比较观［1］。文化相对论认为任何一种文化都有自己的特征和个性，任何文化在价值上是平等的。文化整体观强调人类社会的不同部分是相互整合的，只有对某种习俗生存的广泛背景进行了解，才能真正认识这种习俗的意义。人类学有比较的传统，文化比较重视世界各民族文化的比较，比较可以发现文化的差异性，也可以发现文化的普遍性，端正我们的文化观，自觉摒弃民族中心主义，去除文化自卑感。
因而，人类方法适合进行民族文化的研究。人类学最重要的分支之一是文化人类学，文化人类学又有考古学、语言学和民族学三个分支。文化人类学注重对异文化进行共时性研究，狭义的文化人类学在欧洲一些国家被称为“民族学”，因而不同族群文化的描述、分析和研究是文化人类学研究的热点。
1.2研究民族医药文化常用的人类学方法进行民族文化研究的主要是文化人类学者，他们最本质的研究方法是田野调查，研究者需要深入各民族生活，参与、体验、观察、访谈，从而获得真实客观的第一手资料。文化资料的调查需注重整体性，即对族群的政治、经济、历史、宗教、风俗等进行全方位调查，在分析资料时重视定性分析，通过跨文化比较，寻求文化的普通性或差异性。
另外，也有医学人类学者进行民族医学的研究。医学人类学研究健康、疾病、苦痛、医药与治疗的关系。重视民间疗法，生物与文化的交互作用［2］。是健康与疾病的跨文化研究。民族医学是相对于现代西方生物医学的概念，民族医学取向的医学人类学，研究疾病与病征的社会文化脉络及意涵。民族医疗牵涉到信仰、风俗和特殊的技术，它不同于现代医疗体系。医学人类学对民族医药的研究可以提供一系列文化比较和批判思维，从而提高我们的现代医疗理念。
2人类学方法研究湘西民族医药文化取得的成果
2.1各民族医药文化起源问题研究田华咏从苗族原始神话中探寻远古苗族医药文化，认为苗族医药具有“巫医一家，神药两解”的特殊形态，其医药起源可追溯到“神农尝百草”、蚩尤传神药、祝融传熟食、药王传医方等神话阶段［3］。田华咏在侗族医学史考察过程中重视侗族神话故事《玛麻妹与贯贡》，萨岁的故事，蜥婶的故事等［4］。这些研究都表明，湘西民族医药起源源远流长，受到了汉族文化的影响，民族文化融合交汇的痕迹明显。
2.2民族医药神话、歌谣研究田华咏在苗族医药学发展中通过神农、蚩尤、祝融、欢兜、药王神话故事分析苗药文化特征，包括巫医一家，冷热两因，三生万物等［5］。田华咏对土家族“梯玛神歌”的意义与价值、梯玛神歌对土家族医药文化的贡献进行了阐述，认为梯玛神歌渗透了土家族保健学意识，消灾除疾，体现“神药两解”现象［6］。人类学重视族群中口传神话故事的研究，认为它们反应了早期人类历史文化的诸多方面，可以填补文献记载的空白。湘西的医药神话与歌谣体现了先民积极的保健防病意识，并且深受先秦巫医文化影响。
2.3医药民俗研究李芸等人从文化人类学视角研究湘西苗族赶秋节，对赶秋节源流嬗变、结构组成、和谐内涵进行了深入分析，认为赶秋节是人神共娱的大型活动，极具聚合功能，同时也有娱神和驱邪作用［7］。萧成纹对湘西侗族医药民俗文化和养生保健进行了阐述，认为侗族医药深受冲傩文化影响，巫术祭祀在祛病除邪中起重要作用［8］。湘西少数民族多没有文字，民俗礼仪是研究文化的重要载体。
2.4民族养生保健理念研究刘超祥对土家族卫生保健习俗进行了医学人类学探析，分析了土家族保健习俗的特点，如注重环境卫生，顺和自然环境，讲究生活规律，劳动文体健身，饮食定量均衡，注意食疗等。这些习俗对土家人的健康长寿起到了重要作用，但也有良莠并存现象［9］。莫代山总结了医学人类学方法研究土家族疾病处置的成果，认为医学人类学的本土化尚处于初期阶段，田野工作有待加强［10］。萧成纹认为侗族人民饮食文化中喜吃糯米、酸食、油茶、苦酒，居住防潮吊脚楼，饮水清洁，有月令驱魔习俗，都是养生保健的措施［11］。湘西民族地区长寿现象得益于世代传承的强烈卫生保健意识，生活习俗、保健礼俗的研究具有历史和现实双重意义。
2.5疾病理论研究目前对湘西民族医药的疾病理论整理初具规模，土家族、苗族等都有自己独特的疾病诊疗体系，不同于汉族传统医学。比较有特色的是土家毒气学说等。彭芳胜对毒气的病因病机，毒气病症候和毒气疗法进行了研究［12］，总结了土家医治毒药物的分类整理研究成果［13］。这些研究对我们认识民族医药的特色和优势具有一定价值。
3湘西民族医药文化的人类学研究方向拓展
人类学方法在湘西民族医药研究领域的开展只是近十年才开始的，尽管取得了较大的成果，但总体来说还处于初级阶段，民族医药文化的整体性考察和分析的深度都有待加强。相关的人类学研究方向拓展可考虑以下几点：
3.1湘西巫医文化的深层次解读湘西处于古代巴、楚、苗蛮之地，深受巴文化、楚文化“巫鬼”习俗影响。土家族、苗族、侗族医药都带有深刻的巫医文化色彩。应该从文化相对论的角度来看待此类文化，只有深层次解读巫医文化形成的源流、心理内涵、医疗效果，广泛运用田野调查法、历史梳理法、跨文化比较法等，才能客观公正地认识湘西医药文化的灵魂。
3.2“神药两解”文化现象研究神药两解是大多数湘西民族医药中的常见现象，指在疾病的治疗中既有祭祀除邪等神巫手段，也有医药使用方法，两者杂糅混合，共同发挥治疗效果。这类现象较为复杂，既有迷信之处，也有心理疗法等合理因素，必须结合医学心理学、医学人类学进行“文化——心理——生理”的综合分析。这方面的研究深度还远远不够。
3.3湘西少数民族生命与疾病观念研究湘西各民族医药文化中对生命和疾病的认识与传统中医和西方医学有一定的差异性，民族医药由于脱胎于自然哲学时代，注重天人相应、顺应自然，疾病调治方面土家族重视服侍技术，苗族、侗族都有独特养生调理观念。在这些方面进行跨文化研究可以更深挖掘民族医药的合理内核，为现代医疗提供有益的补充。
3.4民族医药的哲学观念研究近三十年来学者对湘西民族医药的研究在文献收集整理方面做出了卓越成效，《湖南世居少数民族医药宝典》、《土家医方剂学》、《苗家实用药方》、《苗家养生秘录》、《湘西土家族医药调查与临床研究》等民族医药专著陆续出版，为保存、研究湘西民族医药做出了重要的贡献。但是目前的文献研究以梳理总结民族医药的理论体系为主，保护传承的侧重点在医疗技术方面。对各民族医药文化的哲学观念研究较少，湘西民族医药形成历史较早，在历史的长河中由于地域封闭，医药理论变化小，还普遍带有早期自然哲学的观念。如苗族医药三界学说、土家族医药三元理论等。哲学思维是民族医药理论的核心基础，只有理解民族医药的哲学内核，才能更好从根基和整体上把握其特色。
3.5民俗医药文化尚需大力挖掘湘西的苗族、土家族等少数民族没有自己的语言文字，其文化精神是通过一定的仪式、习俗等传承下来的，因此民俗礼仪节日非常多。虽然有学者对此进行了研究，但总体来说还是极少数。湘西五溪地区的盘瓠文化，祭祀时的“椎牛”、“接龙”等仪式，苗族的催生仪式，击猪祭祝融等仪式都值得深度挖掘，从文化人类学角度解读，还原文化核心精神，更好地再现民族医药的精神源流。
总之，经过三十年的研究发展，湘西民族医药取得了丰硕的成果，不断得到国家和政府的重视，但是目前民族医药的发展还没有走出低谷，急需加大在文化、资源、制度等方面的保护和建设。湘西民族医药不仅是湖湘医学文化的重要分支，也是植根民间的医药宝库，值得有识之士积极努力，将其妥善保护、传承，造福人民。
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